Межі в ендокринології

Експериментальна ендокринологія

Редаговано

Доктор Сомен К. Майтра

Університет Вісва-Бхараті, Індія

Переглянуто

Іконг Лі

Медицина Джона Хопкінса, США

Асаманджа Чатторай

Інститут біоресурсів та сталого розвитку (IBSD), Індія

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

Завантажити статтю
- Завантажте PDF
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Додаткові
  Матеріал
Експортне посилання
- EndNote
- Довідковий менеджер
- Простий текстовий файл
- BibTex

ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

1 Медичний центр Лейпцизького університету, Хвороби ожиріння IFB, Лейпциг, Німеччина
2 відділи ендокринології та нефрології, Університет Лейпцига, Лейпциг, Німеччина
3 Кафедра фармацевтичної хімії та біоаналітики, Інститут фармації, Університет Мартіна-Лютера Галле-Віттенберг, Галле, Німеччина
4 Науково-дослідний центр імунології та біології слизової оболонки, штат Массачусетс, лікарня –– Гарвардська медична школа, Бостон, Массачусетс, США
5 Факультет біологічних наук, фармації та психології, Інститут біохімії, Лейпцизький університет, Лейпциг, Німеччина

Передумови: З'являється все більше доказів про роль порушення проникності кишечника при ожирінні та пов'язаних з цим метаболічних захворюваннях. Зонулін - це встановлений сироватковий маркер проникності кишечника і ідентичний прегаптоглобіну2. Тут ми мали на меті дослідити взаємозв’язок між циркулюючим зонуліном та метаболічними ознаками, пов’язаними з ожирінням.

Методи: Зонулін у сироватці крові вимірювали за допомогою широко використовуваного комерційного набору ІФА у 376 суб’єктів із добре охарактеризованої метаболічної когорти сорбів з Німеччини. Крім того, генотип гаптоглобіну визначали у зразках ДНК у всіх досліджуваних.

Результати: Оскільки концентрації зонуліну не корелювали з генотипами гаптоглобіну, ми досліджували специфічність аналізу зонуліну ELISA, використовуючи експерименти з захоплення антитіл, мас-спектрометрію та Вестерн-блот-аналіз. Використовуючи зразки сироватки, які дали найвищий або найнижчий рівень ІФА-сигналів, ми виявили кілька білків, які, ймовірно, будуть захоплені антитілом у цьому наборі. Однак жоден з цих білків не відповідає прегаптоглобіну2. Ми використовували зростаючі концентрації рекомбінантного прегаптоглобіну2 та комплементу С3 як одного з репрезентативних захоплених білків, і набір ELISA також не виявив. Вестерн-блот-аналіз з використанням як поліклональних антитіл, використаних у цьому наборі, так і моноклональних антитіл, піднятих проти зонуліну, продемонстрував подібний характер розпізнавання білка, але з різною інтенсивністю виявлення. Білок (и), виміряний за допомогою набору ELISA, значно збільшився у пацієнтів з діабетом та ожирінням і сильно корелював з маркерами ліпідного та глюкозного обміну. Поєднуючи мас-спектрометрію та Вестерн-блот-аналіз з використанням поліклональних антитіл, що використовуються в наборі ELISA, ми визначили пропердин як іншого члена сімейства зонулінів.

Висновок: Наше дослідження припускає, що ІФА зонуліну не розпізнає прегаптоглобін2, а скоріше структурні (і, можливо, функціональні) аналогічні білки, що належать до асоційованого з маннозою сімейства серинових протеаз, причому найбільш вірогідним кандидатом є пропердин.

Вступ

Тут ми прагнули охарактеризувати взаємозв’язок між циркулюючим сироватковим зонуліном та ознаками, пов’язаними з ожирінням, у метаболічно добре охарактеризованій когорті сорбів з Німеччини. Для вимірювання зонуліну ми використовували комерційно доступний набір ІФА (Іммундіагностика, Бенсхайм, Німеччина). Крім того, ми визначили генотипи HP у всій когорті. Через відсутність відповідності між спостережуваними концентраціями циркулюючого зонуліну та генотипами HP у нашій когорті дослідження, ми далі досліджували можливу ідентичність продукту, захопленого комерційним аналізом ІФА. Ми виявили, що набір ELISA, використаний у цьому дослідженні, не виявляє очищеного пре-HP2, а навпаки, націлений на один або кілька білків із ряду кандидатних молекул, можливо структурно та функціонально пов'язаних із зонуліном. Наші дані також показали, що концентрація білка, виміряна цим ІФА, корелює з параметрами ожиріння та пов'язаними метаболічними ознаками.

Матеріали і методи

Предмети вивчення

Усі випробовувані є частиною вибірки з широко клінічно охарактеризованого населення Східної Німеччини, Сорби (22–24). Широке фенотипування включало стандартизовані анкети для оцінки минулої історії хвороби та сімейної історії, збір антропометричних даних [вага, зріст, співвідношення талії та стегна (WHR)] та оральний тест на толерантність до глюкози. Глюкозу оцінювали методом гексокінази (Automated Analyzer Modular, Roche Diagnostics, Мангейм, Німеччина), а інсулін у сироватці крові вимірювали за допомогою аналізу інсуліну AutoDELFIA (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Турку, Фінляндія). Загальні концентрації холестерину та ТГ у сироватці крові вимірювали стандартними ферментативними методами (CHOD-PAP та GPO-PAP; діагностика Roche). Концентрації LDL-C та HDL-C у сироватці крові визначали за допомогою комерційних однорідних методів прямого вимірювання (Roche Diagnostics). Усі аналізи проводили в автоматизованому аналізаторі клінічної хімії (Hitachi/Roche Diagnostics) в Інституті лабораторної медицини Університетської лікарні м. Лейпциг.

Всі зразки крові відбирали вранці після нічного голодування і зберігали при -80 ° C до аналізів. З 1040 сорбів, занесених у когорту, підгрупа з 376 суб’єктів була генотипована для НР та надала зразки крові для вимірювання зонуліну (таблиця 1). Основні метаболічні характеристики досліджуваних викладені в таблиці 2.

Таблиця 1. Склад досліджуваної когорти, включеної у вимірювання зонуліну.