UBE1L/UBA7 (D6U4S) Кролячий mAb # 61266

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин 293T, фальшиво трансфікованих (-) або трансфікованих конструкціями, що експресують мічений Myc/DDK мічений повнорозмірний людський білок UBE1 (hUBE1-Myc/DDK; +), мічений Myc/DDK мічений людський UBE1L2 білок (hUBE1L2-Myc/DDK; +) та мічений Myc/DDK мічений повнорозмірний людський білок UBE1L (hUBE1L-Myc/DDK; +), використовуючи UBE1L/UBA7 (D6U4S) Кролячий mAb (верхній) та DYKDDDDK Tag Antibody # 2368 (нижній).

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з різних клітинних ліній із використанням UBE1L/UBA7 (D6U4S) кролячого mAb.

UBE1L/UBA7 (D6U4S) Кролячий mAb 61266

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин 293T, макетно трансфікованих (-) або трансфікованих конструкціями, що експресують мічений Myc/DDK мічений повнорозмірний людський білок UBE1 (hUBE1-Myc/DDK; +), мічений Myc/DDK мічений людський UBE1L2 білок (hUBE1L2-Myc/DDK; +) та мічений Myc/DDK мічений повнорозмірний людський білок UBE1L (hUBE1L-Myc/DDK; +), використовуючи UBE1L/UBA7 (D6U4S) Кролячий mAb (верхній) та DYKDDDDK Tag Antibody # 2368 (нижній).

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з різних клітинних ліній із використанням UBE1L/UBA7 (D6U4S) кролячого mAb.

Ваш місцевий представник
Ваша інформація про місцеві покупки
Гарантія антитіл
FAQ
Технічна підтримка
Сертифікат аналізу

Супровідні дані
Супутні товари
Використання продукту
Протоколи
Передумови
Шляхи та білки
Цитати та відгуки

Супровідні дані

РЕАКТИВНІСТЬ	H Mk
ЧУТЛИВІСТЬ	Ендогенні
МВт (кДа)	110
Джерело/Ізотип	Кролячий IgG

Ключ програми:

W-Західний
IP-Імунопреципітація
IHC-Імуногістохімія
ЧІП-Імунопреципітація хроматину
ЯКЩО-Імунофлюоресценція
F-Проточна цитометрія
E-P-ІФА-пептид

Ключ перехресної реактивності виду:

H-Людина
М-Миша
Р.-Щур
Хм-Хом'як
Mk-Мавпа
Мі-Норка
C.-Курка
Дм-D. melanogaster
X-Ксенопус
Z-Данио
B-Бичачий
Dg-Пес
Стор-Свиня
Доктор-S. cerevisiae
Се-C. elegans
Хр-Кінь
Всі-Очікуються всі види

Убіквітин (E4I2J) Кролячий mAb (біотинільований) # 91112

Фосфо-убіквітин (Ser65) (E2J6T) Кролячий mAb # 62802

Фосфо-убиквітин (Ser65) (E5T1W) Кролячий mAb # 70973

ISG15 (22D2) Кролячий mAb # 2758

Убіквітин (E4I2J) Кролячий mAb # 43124

Убіквітин (P4D1) Миша mAb # 3936

Набір пробовідбірників антитіл до складання та стабільності білка # 4889

Убіквітин (P4D1) Мишаче mAb (кон'югат HRP) # 14049

Розгалужений набір пробовідбірників антитіл до убіквітину # 33959

ISG15 Антитіло # 2743

Інформація про використання продукту

Зберігання

Поставляється в 10 мМ HEPES натрію (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 100 мкг/мл BSA, 50% гліцерину та менше 0,02% азиду натрію. Зберігати при –20 ° C. Не аліквотуйте антитіло.

Протокол

Вестерн-протокол промокання

Для вестерн-блоттингу інкубуйте мембрану з розведеним первинним антитілом у 5% мас./Об. BSA, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 при 4 ° C з легким струшуванням протягом ночі.

ПРИМІТКА: Будь ласка, зверніться до веб-сторінки первинного продукту антитіл щодо рекомендованого розведення антитіл.

А. Розчини та реагенти

Від підготовки зразка до виявлення, реагенти, необхідні для вашого Western Blot, тепер знаходяться в одному зручному наборі: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

ПРИМІТКА: Приготувати розчини з деіонізованою зворотним осмосом (RODI) або рівноцінною водою.

B. Зміщення білків

Загальний протокол підготовки зразків.

Обробляйте клітини, додаючи свіжий носій, що містить регулятор протягом бажаного часу.
Аспіратні засоби масової інформації з культур; промити клітини 1X PBS; аспірувати.
Лізують клітини шляхом додавання 1X буфера зразка SDS (100 мкл на лунку 6-лункової пластини або 500 мкл для пластини діаметром 10 см). Негайно зішкребіть клітини з пластини і перенесіть екстракт у пробірку для мікроцентрифуги. Тримайся на льоду.
Ультразвук протягом 10–15 с для завершення лізису клітин та зсуву ДНК (для зменшення в’язкості зразка).
Нагрійте 20 мкл зразка до 95-100 ° C протягом 5 хв; прохолодно на льоду.
Мікроцентрифуга протягом 5 хв.

Завантажте 20 мкл на гель SDS-PAGE (10 см x 10 см).

ПРИМІТКА: Рекомендується завантаження попередньо фарбованих маркерів молекулярної маси (# 13953, 5 мкл/смуга) для перевірки електротрансферу та біотинільованих білкових драбин (# 7727, 10 мкл/смуга) для визначення молекулярних ваг.

Електротрансфер на нітроцелюлозну мембрану (# 12369).

C. Блокування мембрани та інкубації антитіл

ПРИМІТКА: Обсяги для 10 см х 10 см (100 см 2) мембрани; для мембран різного розміру відповідно регулюйте гучність.

I. Блокування мембрани

(Необов’язково) Після перенесення промийте нітроцелюлозну мембрану 25 мл TBS протягом 5 хв при кімнатній температурі.
Інкубуйте мембрану в 25 мл блокуючого буфера протягом 1 години при кімнатній температурі.
Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.

II. Первинна інкубація антитіл

Інкубуйте мембрану та первинне антитіло (при відповідному розведенні та розчиннику, як рекомендовано на веб-сторінці продукту) у 10 мл первинного буфера для розведення антитіл, обережно перемішуючи протягом ночі при 4 ° C.
Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
Інкубуйте мембрану з анти-кролячим IgG, зв'язаним з HRP антитілом (# 7074 на 1: 2000) та антибіотином, зв'язаним з HRP-антитілом (# 7075 на 1: 1000–1: 3000) для виявлення біотинільованих білкових маркерів у 10 мл блокуючий буфер з легким перемішуванням протягом 1 години при кімнатній температурі.
Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
Продовжуйте виявлення (Розділ D).

D. Виявлення білків

Вказівки щодо використання:

Промийте зв’язаний з мембраною HRP (кон’югат антитіл) тричі протягом 5 хвилин у TBST.
Приготуйте 1X реагенту SignalFire ™ ECL (# 6883), розбавивши одну частину 2X реагенту A та одну частину 2X реагенту B (наприклад, для 10 мл додайте 5 мл реагенту A та 5 мл реагенту B). Добре перемішати.
Інкубуйте субстрат з мембраною протягом 1 хвилини, видаліть надлишок розчину (мембрана залишається вологою), оберніть пластиком і піддайте рентгенівській плівці.

* Уникайте повторного впливу на шкіру.

розміщено в червні 2005 року

переглянуто в червні 2020 року

Специфічність/Чутливість

UBE1L/UBA7 (D6U4S) Кролячий mAb розпізнає ендогенні рівні загального білка UBE1L/UBA7. Це антитіло не перехресно реагує ні з білками UBE1/UBA1, ні з UBE1L2/UBA6.

Видова реактивність:

Джерело/Очищення

Моноклональні антитіла отримують імунізацією тварин синтетичним пептидом, що відповідає залишкам поблизу карбоксильного кінця людського білка UBE1L/UBA7.

Передумови

Активуючий убіквітин фермент Е1-подібний білок/Убіквітин-активуючий фермент 7 (UBE1L/UBA7) є активуючим ферментом для ISG15. Дослідження показали, що втрата експресії UBE1L/UBA7 сприяє розвитку раку легенів через компрометоване інгібування експресії цикліну D1 (12-15). UBE1L/UBA7 також був залучений до патогенезу гострого промієлоцитарного лейкозу за допомогою механізму, за допомогою якого UBE1L/UBA7 керує ISG15 ілатуванням онкогенного злитого білка PML-RARα для сприяння його деградації (16,17).

Шляхи та білки

Дослідіть шляхи + білки, пов’язані з цим продуктом.