Повна пропозиція Тавтога

Ми маємо на меті показати, що набір основних біохімічних вимірювань у поєднанні з простими вимірами орієнтирів та сучасним морфометричним аналізом може сприяти віднесенню кількісного показника стану розвитку до ембріональної та личинкової стадій риб. Ця батарея вимірювань буде використовувати сучасну недорогу технологію, яка може бути застосована до окремих ембріонів. Цей підхід дозволить розробити факторіальні експерименти для оцінки різних аспектів методів аквакультури щодо швидкості та рівномірності росту личинок. Факторні експерименти розробляються нашими партнерами з НМФ, Діном Перрі та Лорел Рамзаєр, щоб перевірити ефективність визначених застосовуваних режимів харчування. Дієтичні фактори, що підлягають тестуванню, включають різні види живих водоростей, культивованих у лабораторії NMF Мілфорда, які будуть проаналізовані щодо їх спектру вмісту поліненасичених жирних кислот та амінокислот. Час переходу до менш дорогої комерційної дієти для риби буде фактором при розробці експерименту. Контрастні дієти будуть побудовані на основі аналізованих компонентів з поліненасиченими жирними кислотами С3 та С6 (ПНЖК) як основними змінними. 3. МЕТОДИЧНИЙ ПРОГРЕС

повна

Біохімічні методи.
Лабораторія Кункеля знайома з методами екстракції ліпідів, амінокислотного аналізу та гравіметричного визначення% ліпідів у біологічних зразках (Kunkel and Pan, 1976). Перші кілька місяців нашого проекту було витрачено на розробку методів екстракції та аналізу ліпідів. Зараз ми можемо готувати ліпідні екстракти зразків, які будуть надані лабораторією Мілфорда на рівні однієї риби. Поліненасичені профілі аналізуються під керівництвом доцента Еріка Декера з Департаменту харчових наук США. Аналіз вмісту білка, РНК і ДНК в отриманих яйцях і личинках буде проводитися за встановленими протоколами в лабораторії Кункеля. Ми отримали 8 мл зразка тавтогових яєць, за допомогою яких очищаємо кальмодулін та Lv і робимо антисироватку проти тавтог-Lv. Крім того, наші процедури в цьому відношенні нещодавно були опубліковані, оскільки ми застосовували їх до Зимової камбали (Hartling et al., 1997, 1999)

Вимірювання зростання.
За останнє десятиліття морфометрія пережила революцію. Від старих статистичних методів відмовляються на користь нового підходу, який дозволяє мати справу з розмірами та загальною формою організму. Нові інструменти для вивчення фігури були розроблені і застосовуються до тавтог.
4. ПРОДУКЦІЯ, ЩЕ ВСТУПАЄТЬСЯ

  1. Двоє робітників навчились протоколу екстракції ліпідів та підготовці зразків для газової хроматографії ПНЖК.
  2. Встановлено зовнішній стандарт та визначено стандарти для ПНЖК
  3. Норми ПНЖК для риби були проаналізовані та використані для оцінки структури ПНЖК у зразках тканин риби.
  4. Три невеликі партії ембріонів таутогу були отримані з лабораторії Мілфорда, і дві з них використовувались до цього часу для встановлення морфометричного підходу до показників росту та розвитку.
  5. Яйця таутогу отримані для очищення Lv та кальмодуліну, а один студент пройшов навчання з аналізу CaM.

Хартлінг Р.К., Дж. Дж. Перейра та Дж. Г. Кункель. 1997. Характеристика термостійкої фракції ліповітелліну та розробка імунологічного аналізу на вітелогенін та білок жовтка у камбали озимої (Pleuronectes americanus). J. Exp. Зоол. 278: 156-166.

Хартлінг Р.К. та Кункель Дж. 1999. Доля розвитку жовткового білка ліповітеллін в ембріонах та личинках озимої камбали, Pleuronectes americanus. J. Exp. Зоол. (в пресі).

Кункель Й.Г. та М.Л. Пан. 1976. Селективність поглинання білка жовтка: Порівняння вітелогенінів двох комах. J. Фізіол комах. 22: 809-818.

Перрі, Д. та Л. Рамзаєр. 1997. Вплив харчової жирної кислоти та амінокислотного складу на швидкість росту та склад тіла личинки Таутог (Таутога Оніт) та на репродуктивний успіх Тавтога дорослого. Проектні пропозиції NOAA/CMER.