Вивчення механізму противиразкової дії кокосової олії незайманого типу на моделі щурів, спричиненої виразкою шлунка

Цзе Менг

1 Кафедра ортопедії, афілійована лікарня Університету Хебей, Баодінг, Китай

Таопінг Чень

1 Кафедра ортопедії, афілійована лікарня Університету Хебей, Баодінг, Китай

Ю Чжао

2 Університет Хебей, Баодін, Китай

Сукай Лу

1 Кафедра ортопедії, афілійована лікарня Університету Хебей, Баодінг, Китай

Хілінг Ю.

1 Кафедра ортопедії, афілійована лікарня Університету Хебей, Баодінг, Китай

Ін Чанг

1 Кафедра ортопедії, афілійована лікарня Університету Хебей, Баодінг, Китай

Далей Чень

1 Кафедра ортопедії, афілійована лікарня Університету Хебей, Баодінг, Китай

Анотація

Вступ

Це дослідження має на меті оцінити гастрозахисні ефекти кокосової олії (VCO) на різні моделі виразки порівняно зі стандартним препаратом (омепразолом).

Матеріал і методи

Три групи щурів (по 6 щурів на групу для кожної моделі виразки) попередньо обробили дистильованою водою для негативної контрольної групи, 30 мг/кг омепразолу для позитивної контрольної групи та VCO (2 мл на щура) для лікувальної групи. . Тварин попередньо обробляли протягом 7 днів, а виразки викликали холодним стримуючим стресом, перев'язуванням піроксикаму, етанолу та пілорусу. На восьмий день тварин приносили в жертву і визначали показники виразки на основі макроскопічної оцінки. Об’єм шлунку, рН, загальну кислотність та вміст слизу вимірювали на моделі, пов’язаній з пілорусом. Рівні антиоксидантів визначали за гомогенатами шлункової тканини.

Результати

Віргінське кокосове масло значно антиоксидант, гастрозахисна, виразкова хвороба, лікування, кокосове масло незайманого типу

Вступ

Виразкова хвороба є багатофакторним та хронічним захворюванням [1]. На сьогоднішній день виразка шлунка та дванадцятипалої кишки є домінуючою серед хвороб, якими страждає значна кількість людей у світі [2]. На основі систематичного огляду було зазначено, що річний рівень захворюваності на виразкову хворобу оцінювався як 0,10–0,19% для діагностованих лікарем випадків та 0,03–0,17% для тих, що були зафіксовані на дату госпіталізації з прогнозом, тісно пов’язаним із хелікобактером інфекція пілорі [3].

Як правило, виразки виникають внаслідок переривань нормальної рівноваги шлунка, що спричинене посиленою або зниженою стійкістю слизової оболонки [4]. Більше того, деякі схильні фактори, пов'язані з розвитком захворювання, включають неадекватні дієтичні звички, такі як куріння або алкоголь, тривалість голодування, характер прийому їжі, стійке зараження H. pylori, використання ацетилсаліцилової кислоти (АСК) та нестероїдних протизапальні препарати (НПЗЗ), порушення слизового бар’єру внаслідок стресу, синдром Золлінгера-Еллісона і, нарешті, генетичні спадкові фактори, що призводять до вищих шансів придбати виразку дванадцятипалої кишки для людей із сімейною історією захворювання, крім крові типу О група [5]. Лікування виразкової хвороби, яке широко використовується в клінічній практиці, це антагоністи мускарину (пірензепін), антациди (гідроксид алюмінію та трисиликат магнію), антагоністи рецепторів гістаміну-Н-2 (циметидин і ранітидин), інгібітори протонної помпи (омепразол та лансопразол) та протимікробні засоби засоби для знищення H. pylori (амоксицилін та кларитроміцин) [6].

Сучасні цілі лікування виразкової хвороби - полегшення болю, загоєння та запобігання рецидиву виразки. Фармакологія кожної категорії препаратів різна. Однак загальним механізмом або правилом, що застосовується до всіх категорій, є те, що всі вони загалом діють на пригнічення секреції шлункової кислоти, блокуючи шлункову Н + К + -АТФазу (інгібітори протонної помпи) [7], блокуючи рецептори Н-2 (Н -2 антагоніста рецепторів) або через стимуляцію секреції слизу та бікарбонату для зміни кровотоку слизової оболонки [8].

Тим не менше, повне відновлення виразкової хвороби з використанням сучасних фармакологічних підходів не існує. Окрім цього, було розглянуто багато несприятливих наслідків стосовно постійного вживання таких препаратів, як аритмія, гіпомагніємія, гіперчутливість, імпотенція та гінекомастія [9]. Крім того, деякі з цих ліків є дорогими [10] і мають високий ризик спричинити рак шлунка та пізніші стадії захворювання [11]. Таким чином, ця загадка спонукала дослідників визначити нове терапевтично безпечне та ефективне лікування для повного викорінення проблеми. З цієї точки зору рослини набувають все більшого значення, оскільки вони є основним фактором, що сприяє біоактивним молекулам, що мають протиульцерогенні властивості [12]. Серед лікарських рослин олії, отримані з видів рослин, також набувають широкої популярності своїми терапевтичними властивостями.

Нещодавно кілька досліджень повідомляли про ефективність кокосової олії (VCO) у лікуванні та профілактиці виразкової хвороби значно порівняно з кокосовою олією, відомою також як олія копра (CO) [13]. Основні відмінності між VCO та CO зумовлені методом екстракції, що призводить до різниці в їх перевагах. Віргінське кокосове масло класифікується як масло, добуте зі свіжо-сухого зрілого ядра кокосового горіха (Cocos nucifera L.) за допомогою ферментативної та/або техніки бродіння без безпосереднього нагрівання, тоді як олія копра виробляється шляхом прямого нагрівання [14]. Оскільки виробничий процес не включає тепло, VCO не зазнає жодних перетворень і, таким чином, зберігає такі корисні компоненти, як вітаміни, антиоксиданти, жирнокислотний компонент лауринова кислота та інші жирні кислоти із середнім ланцюгом (MCFA), які допомагають травленню [15]. . Більше того, VCO є їстівною їжею, яку можна включити в наш раціон і приймати безпосередньо без рецепта лікаря, не викликаючи побічних ефектів.

Незважаючи на те, що дослідження повідомляли про вплив VCO на виразкову хворобу [13], ще не проведено жодного дослідження для з'ясування механізму інгібування виразки. Це дослідження має на меті виявити можливий механізм дії VCO у виразкових моделях.

Матеріал і методи

Приготування кокосової олії

Низькотемпературна техніка була застосована при приготуванні ГКО. Твердий ендосперм дозрілого свіжого кокосового горіха подрібнювали і перетворювали на в’язку суспензію [16]. Пізніше його механічно віджимали через сирну тканину для збору кокосового молока. Молоко витримували в холодильнику і заморожували протягом 48 год, потім нагрівали при 500 ° С за допомогою термостата. Після нагрівання зібране масло фільтрували за допомогою сирної тканини. Загальний урожай становив приблизно 40–50%.

Наркотики та хімікати

Всі хімічні речовини та розчинники були аналітичного класу та включали омепразол (Sigma Aldrich, Сент-Луїс, США, США), етанол (Merck, Великобританія), фенолфталеїн (Merck, Великобританія), альціановий синій (Merck, Великобританія), хлорид магнію (Merck, Великобританія), сахароза (Merck, Великобританія) та цитрат натрію (Merck, Великобританія).

Підготовка тварин

Всього з нашого центру годівлі тварин було отримано 72 щури вістар (40 днів) вагою 200–250 г. Усі проведені дослідження були схвалені комісією з питань догляду за тваринами та етики згідно із застосованими протоколами (ACUC No: HDFY-LL-2016-19). Тварин витримували при кімнатній температурі (25–28 ° C) протягом мінімум семи днів для акліматизації до кімнатних умов до експериментальної процедури. Тварин утримували у групах по шість тварин у стандартній клітці для кожної експериментальної групи у стандартних умовах навколишнього середовища (25 ± 3 ° C), з 12-годинним темним/12-годинним світловим циклом та їжею та водою ad libitum [17].

Противиразкові та цитопротекторні дослідження

Дослідних щурів розділили на три групи, що складалися з 6 щурів на групу. Щурів кожної групи попередньо обробляли перорально дистильованою водою (10 мг/кг) для негативної контрольної групи, омепразолом (30 мг/кг) [13, 18] для позитивної контрольної групи та VCO (2 мл на щура) [ 19] для групи лікування протягом семи днів і голодували протягом 24 год на восьмий день перед процедурою індукції виразки. Групування було однаковим для кожної моделі індукції виразки.

Індукція виразки шлунка

Виразка шлунка під впливом холодного стримування

На 8 день щурів паралізували, прив’язавши передні і задні кінцівки до плоскої дерев’яної дошки, і перенесли в холодильник (4–6 ° C). Через дві години щурів забивали шляхом вивиху шийки матки. Шлунок розрізали вздовж більшої кривизни, а просвіт промивали звичайним сольовим розчином. Оцінка виразки проводилася на основі методу, описаного Minano et al. [20]. Потім фундальну частину шлунка гомогенізували (5%) і центрифугували. Отриманий супернатант використовували для вивчення активності за допомогою аналізу антиоксидантних ферментів. Відсоток інгібування розраховували за такою формулою [21]:% інгібування = (UI для контролю (негативний) - UI для групи лікування)/UI для контролю (негативний).

Виразка шлунку, спричинена етанолом

Дослідних щурів кожної групи попередньо обробляли, як пояснювалося раніше, протягом 7 днів і голодували протягом 24 годин до восьмого дня. На 8 день у тварин індукували виразку пероральним введенням абсолютного етанолу (1 мл/200 г) [22, 23]. Через 1 год індукції виразки тварин забивали шляхом вивиху шийки матки. Шлунок розсікали для макроскопічного дослідження виразок. Оцінка виразки визначалась за допомогою методу, описаного в попередньому дослідженні.

Модель виразки, індукованої піроксикамом

Інший набір щурів попередньо обробляли протягом 7 днів, як описано раніше. Потім тварин голодували протягом 24 годин на восьмий день. На 8 день щурам вводили піроксикам (30 мг/кг) [4]. Після 6 год індукції піроксикаму тварин забивали шляхом вивиху шийки матки. Щурів розтинали і розрізали шлунки вздовж більшої кривизни. Просвіт шлунка промивали звичайним сольовим розчином і досліджували. Оцінка виразки проводилась із використанням методу, описаного в попередньому дослідженні.

Щури, перев’язані пілорусом

Тварин попередньо обробляли протягом семи днів, як було описано раніше, і щурів голодували протягом 24 год на восьмий день, щоб забезпечити повне спорожнення шлунку і дозволити воду за бажанням. На 8 день тварин знеболювали шляхом інтраперитонеального введення пентобарбітону натрію (35 мг/кг) [24, 25]. Після анестезії живіт розкрили та провели перев’язку пілорусу, не завдаючи шкоди кровопостачанню. Потім шлунок ретельно замінили і черевну стінку закрили у два шари з перерваними швами з вологим тампоном із фізіологічним розчином. Через 4 год кожен шлунок розсікали і розрізали вздовж більшої кривизни [26, 27]. Індекс виразки (UI) визначали за допомогою шкального оцінювання Minano et al. [20].

Вимірювання об’єму шлункового соку, загальної кислотності, рН та вмісту шлункового слизу

Після розтину та видалення шлунка збирали шлунковий сік. Потім його центрифугували протягом 5 хв при 3000 × g, тоді як супернатант відокремлювали і використовували для аналізу рН, об'єму шлункового соку та загальної кислотності. Загальну кислоту оцінювали титруванням 0,01 N гідроксиду натрію з використанням реагенту Топфера в якості показника для отримання загальної кислотності, вираженої у мекв/л [28]. Вміст шлункового слизу визначали за допомогою методу, описаного Corne et al. [29] із модифікацією. Шлунок видаляли, розкривали уздовж меншої кривизни і промивали холодним сольовим розчином.

Аналіз

Аналіз антиоксидантних ферментів

Рівні супероксиддисмутази (SOD), глутатіонредуктази (GR), глутатіонпероксидази (GP), каталази (CAT), малонового діальдегіду (MDA) та нітриту визначали за допомогою комерційно доступного набору ELISA (Cayman, США) [30].

Визначення синтезу простагландину Е2

Рівень простагландину визначали за допомогою набору моноклонального імуноферментного аналізу простагландину E2 (PGE2) (ELISA) (R&D Systems, США) [31].

Статистичний аналіз

Таблиця III

Противиразкові ефекти кокосової олії (VCO) на індукованих піроксикамом щурів

Лікування Індекс виразки Відсоток гальмування (%)

Негативний контроль	3,67 ± 0,21	-
Позитивний контроль (омепразол - 30 мг/кг)	1,50 ± 0,22	59
VCO (10 мл/кг)	1,00 ± 0,26	72,7

Значення виражаються як середнє значення ± SEM; n = 6.

Вплив кокосової олії незайманого типу на модель виразки, викликаної лігуванням пілорусу

Таблиця V

Противиразкові ефекти кокосової олії (VCO) на антиоксидантні аналізи

ЛікуванняGP [U/мг білка] SOD [U/mg білка] MDA [U/mg білка] CAT [U/mg білка] GSH [U/mg білка] Нітрит [нмоль/г]

Негативний контроль	0,97 ± 0,12	4,15 ± 0,30	0,70 ± 0,04	11,53 ± 0,35	4,62 ± 0,17	78,60 ± 2,53
Позитивний контроль (омепразол - 30 мг/кг)	0,62 ± 0,07 *	1,85 ± 0,1 ***	0,32 ± 0,02 ***	7,00 ± 0,12 ***	7,13 ± 0,18 ***	141 ± 4,21 ***
VCO (10 мг/кг)	0,20 ± 0,06	1,02 ± 0,13	0,17 ± 0,02	4,66 ± 0,16	10,27 ± 0,24	171,2 ± 4,47

Таблиця VI

Противиразковий ефект кокосової олії (VCO) на синтез простагландину Е2 (PGE2)

Лікування PGE2 [пг/мг тканини]

Негативний контроль	50,50 ± 2,93
Позитивний контроль (омепразол - 30 мг/кг)	110,70 ± 5,77
VCO (10 мг/кг)	158,3 ± 5,27

Значення виражаються як середнє значення ± SEM; n = 6.

Обговорення

Омепразол - широко використовуваний противиразковий препарат, що належить до інгібіторів протонної помпи (ІПП), для лікування виразкової хвороби, спричиненої стресом, нестероїдними протизапальними препаратами та інфекціями H. pylori [34]. Як правило, відомо, що ІПП діють, пригнічуючи секрецію кислоти і викликаючи незворотну взаємодію з протонним насосом Н + К + - АТФази. Однак інше дослідження показало, що омепразол діє як потужний антиоксидант для знешкодження вільних радикалів кисню та запобігає окислювальним пошкодженням, збільшуючи перекисне окислення ліпідів та окислення білків, в експерименті, проведеному з використанням трьох різних моделей виразки, стресу, індукованого індометацином та лігування пілорусу. моделі [35]. Таким чином, у цьому дослідженні омепразол був обраний стандартним препаратом для групи, яка отримувала позитивний контроль.

Виразка, спричинена стресом, може бути спричинена секрецією гістаміну парієтальними клітинами. Крім того, наявність активних форм кисню (АФК) через стрес також може спровокувати пошкодження шлунка, що призводить до виразки. Окрім цього, кислотні та пепсинові фактори також відіграють певну роль у патогенезі виразки, спричиненої стресом. Збільшення генерації АФК під час стресу призведе до окисного пошкодження та спричинить пошкодження шару слизової. Виразка, спричинена стресом, також призводить до зменшення вироблення слизу. У поточному дослідженні VCO суттєво (р Arrieta J, Benitez J, Flores E, Castillo C, Navarrete A. Очищення гастропротективних тритерпеноїдів від кори стебла Amphipterygium adstringens: роль простагландинів, сульфгідрилів, оксиду азоту та нейронів, чутливих до капсаїцину. Planta Medica 2003; 69: 905–9. [PubMed] [Google Scholar]