Система CRISPR – Cas дозволяє швидко і просто редагувати геном промислових штамів Saccharomyces cerevisiae

Додати до Менділі

Основні моменти

Ми розробили систему на основі CRISPR – Cas9 для генних збоїв у промислових дріжджах.

Ми показали високий коефіцієнт ефективності зривів у неспоріднених промислових штамах.

Вторгнення генів може проводитися одночасно з порушенням генів.

Використання описаної системи на основі Cas9 призводить до стабільних генетичних модифікацій без маркерів.

Метод застосовувався для одностадійної конструкції штамів, що продукують молочну кислоту.

Анотація

Існує попит на розвиток біозаводів третього покоління, які інтегрують виробництво енергії та виробництво хімічних речовин вищої вартості з відновлюваних вихідних сировинних ресурсів. Тут надійними і стійкими до стресів промисловими штамами Saccharomyces cerevisiae будуть підходящими виробничими організмами. Однак їх генетичні маніпуляції є складними, оскільки вони, як правило, диплоїдні або поліплоїдні. Тому існує потреба у розробці більш ефективних засобів генної інженерії. Ми застосували систему CRISPR – Cas9 для редагування геномів різних промислових штамів і показали одночасне порушення двох алелів гена в декількох неспоріднених штамах з ефективністю від 65% до 78%. Ми також домоглися одночасного руйнування та введення гена-репортера та продемонстрували застосовність методу, розробивши штами, що продукують молочну кислоту, в одній події трансформації, де інсерція гетерологічного гена та порушення двох ендогенних генів відбувалися одночасно. Наше дослідження забезпечує основу для ефективного проектування промислових заводів дріжджових клітин.

Попередній стаття у випуску Далі стаття у випуску