Агар МакКонкі

Пов’язані терміни:

Агар
Enterobacteriaceae
Шигела
Шоколадний агар
Сальмонели
Грамнегативні бактерії
Бактерія
Інфекційний агент
кишкова паличка

Завантажити у форматі PDF

Про цю сторінку

Носії для лабораторії клінічної мікробіології

Селективні та диференціальні середовища

Агар МакКонкі не тільки відбирає для грамнегативних організмів, пригнічуючи грампозитивні організми та дріжджі, але також диференціює грамнегативні організми шляхом ферментації лактози. Лактозні ферменти забарвлюються в рожевий колір, тоді як нелактозні ферменти будуть ясними колоніями. Засоби масової інформації також мають додаткову перевагу, що перешкоджає роїнню Протея.

Еозин-метиленовий синій - ще одне середовище, яке вибірково вирощує грамнегативні організми, водночас інгібуючи грампозитивні організми та деякі дріжджі, використовуючи токсичні барвники. Зовнішній вигляд кишкових бактерій на цьому середовищі залежить від їх здатності ферментувати бродіння лактози та сахарози. Кишкова паличка матиме зелений металевий блиск.

Додаткові середовища, селективні для негативів за Грамом, але спеціально розроблені для диференціації збудників стільця, включають гектоен-кишковий агар (ВІН), який містить жовчні солі. На додаток до відбору для грамнегативних організмів, середовища також дозволяють передбачувану диференціацію сальмонел та шигел від інших грамнегативних організмів, таких як кишкова паличка. Кишкова паличка та інші ферменти лактози дадуть колонії жовтого або оранжевого кольору. Нелактозні ферментатори, включаючи шигели, утворюють зелені колонії, тоді як сальмонели виглядають як чорні колонії завдяки виробництву сірководню. Інші організми виробляють сірководень і виглядають у вигляді чорних колоній на агарі ВІН, включаючи Citrobacter spp.

МІКРОБІОЛОГІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ ПРОДУКТІВ

В.Ф. Харріган, Маргарет Е. Макканс, в лабораторних методах в мікробіології, 1966

1 Виявлення та перелік бактерій-індикаторів

(а) Коліформні організми

Бульйон МакКонкі та агар МакКонкі не є задовільним середовищем для виявлення та перерахування коліформних організмів у продуктах харчування. Один з найнадійніших методів використовує фіолетовий червоний жовчний агар для підрахунку кількості пластин.

Процедура

Приготуйте повторювані набори тарілок, використовуючи 1 мл кількості вибраного діапазону розведень їжі. Додайте до кожної пластини 15 мл фіолетово-червоного агару, розтопленого та охолодженого до 45 ° C, добре перемішайте і дайте застигнути. Нарешті накладіть ще 5 мл фіолетового червоного жовчного агару. Давши затвердіти, переверніть пластини та інкубуйте при температурі 35 ° C протягом 24 годин. Після інкубації підрахуйте кількість темно-червоних колоній. Зазвичай типові коліформні колонії мають діаметр 0,5 мм і більше і свідчать про випадання солей жовчі в середовищі, що безпосередньо оточує колонії, але, звичайно, переповнення колоній призведе до зменшення їх розміру. У разі продуктів, що містять вуглеводи, крім лактози, середовища, до яких додані низькі розведення їжі, можуть дати аномальні результати. Отже, на пластинах з розведенням 10-2 або нижче розряди необхідно підтвердити передбачувані коліформні колонії або як коліформи, відібравши їх та посівши відвар лактози або відвар МакКонкі та інкубуючи при 35 ° C або як E. coli за тестом Ейкмана (див. Сторінку 94).

Альтернативна процедура

Якщо очікується, що у зразку їжі буде присутній дуже мала кількість коліформних бактерій, може бути проведена підрахунок пробірки для розведення, але рекомендується використовувати відвар лаурилтриптози, а не відвар МакКонкі. Асептично прокапайте по 1 мл кожного з підготовлених розведень їжі в кожну з п’яти пробірок відвару лаурилтриптози. Інкубуйте при температурі 35 ° C. Через 24 і 48 годин досліджують на вироблення кислоти та газу. Вироблення кислоти визначається додаванням індикатора рН в пробірки після інкубації. Передбачуваний позитив реєструється, якщо в пробірці відображається утворення кислоти та газу, достатнього для заповнення увігнутості пробірки Дарема, або шипучих, коли відбивається бік пробірки. При звичайних випробуваннях видобуток газу зазвичай розглядається як свідчення передбачуваного позитивного без необхідності тестування на вироблення кислоти. Передбачувані позитивні пробірки при низькому розведенні (до 10-2) слід підтвердити шляхом пересіву в бульйон лаурилтриптози та інкубації при температурі 35 ° C. Щодо підрахунку кишкової палички, субкультуру передбачувано позитивних пробірок пропускають у бульйон лаурилтриптози та інкубують при температурі 44 ± 0,25 ° C. Найбільш вірогідну кількість коліформних бактерій або кишкової палички можна розрахувати за таблицями ймовірностей (див. Додаток).

(b) Enterococcis

Ентерокок є корисним індикаторним організмом для деяких продуктів харчування, оскільки в порівнянні з кишковою паличкою він більш стійкий до замерзання, низького рН та помірної термічної обробки. Таким чином, ентерококи часто можна виявити в заморожених продуктах, фруктових соках або продуктах, які пройшли побіжну термічну обробку, навіть коли кишкова паличка була вбита в результаті ворожих умов. Ентерококи тут розглядаються як такі, що включають стреп. faecalis та Strep. faecium (та сортові форми Strep. faecalis var. liquefaciens, Strep. faecalis var. zymogenes) та Strep. durans, за винятком Strep. Бовіс і Стреп. еквінус.

Процедура

Введіть піпеткою 1 мл кількості вибраного діапазону розведень у набір чашок Петрі. Додайте до кожної пластини 15 мл розплавленого азару мальтози азиду тетразолію при 45 ° C, ретельно перемішайте з посівним матеріалом і дайте застигнути. Інкубуйте при температурі 35 ° C протягом 48 годин. Після інкубації підрахуйте кількість колоній, які мають темно-червоний колір або мають червону або рожеву центральну область (якщо можливо, відбираючи пластини з 30 до 300 колоніями). Обчисліть і запишіть кількість ентерококів на грам їжі.

Альтернативна процедура

Якщо в зразку їжі передбачається присутність дуже малої кількості ентерококів, можна провести підрахунок пробірки для розведення з використанням відвару азиду мальтози як селективного середовища. Асептично прокапайте по 1 мл кожного з приготовлених розведень у кожну з п’яти пробірок відвару азиду мальтози. Інкубуйте при температурі 35 ° C протягом 48 годин. Дослідіть пробірки після інкубації на вироблення кислоти, що свідчить про ентерококи. Обчисліть найбільш вірогідну кількість ентерококів за допомогою таблиць ймовірностей (див. Додаток).