Біологічні ефекти продуктів переробки винограду з поліфенолів при експериментальному метаболічному синдромі

Критеріями РС були: абдомінальне ожиріння, гіперглікемія, гіперхолестеринемія та тенденція до зниження ліпопротеїдів високої щільності [16].

Щурів приносили в жертву під наркозом хлороформу відповідно до Міжнародних рекомендацій з біомедичних досліджень з використанням тварин (1985) та Правил лабораторної практики в Російській Федерації (Протокол № 267 Міністерства охорони здоров'я Російської Федерації, 19 червня 2003 р. ). Експерименти проводились відповідно до дозволу Вченої ради Кримського медичного інституту (Закон № 103 від 30.11.77 р.). Утримання тварин було затверджено Інституційним комітетом з біоетики та відповідає Керівним принципам по догляду та використанню лабораторних тварин, опублікованим NIH США (№ 85-23, переглянутий 1985).

Поліфеноли, використані в дослідженні

В якості продуктів переробки винограду з поліфенолу у дозі 2,5 мл/кг (0,05 мл на кожну тварину) використовувались “Enoant”, “Enoant-premium” та “Fenocor” (ТОВ “RESSFUD”, Ялта, Росія). Дозування вводили разом з 0,05 мл води щодня перорально через зонд протягом 4 тижнів після 5-го тижня розвитку РС.

За даними фітохімічних досліджень оксибензойні кислоти та флавоноїдні поліфеноли у складі “Enoant”, “Enoant-premium” та “Fenocor” переважно представлені галовою кислотою, катехолом, епікатехіном, кверцетином та проціанідинами, представленими в Таблиці 1 [17, 18].

Вибір названих продуктів переробки винограду (GPP) був натхненний деякими обставинами. Нещодавно було показано, що поліфенольна антиоксидантна активність концентрату «Фенокор» внаслідок придушення перекисного окислення ліпідів та окисної модифікації білків призводить до блокування окисного стресу - важливого патогенетичного механізму пошкодження клітинної мембрани при гістотоксичній гіпоксії [19]. У той же час, існує меншість сучасних досліджень щодо корекції складних порушень, таких як РС, за допомогою GPP з червоного винограду. У дослідженні [20] обговорюються деякі позитивні ефекти білих вин при РС. Однак не досліджувалося, як вони впливають на метаболічні параметри при РС, що було б корисно для корекції пацієнтів з названим діагнозом. Крім того, сучасні дані доводять, що поліфеноли починають ефективно діяти з концентрації 20 г/л [21-23], тоді як використовувані білі вина містять лише від 1,70 до 0,44 г/л поліфенолів. Ось чому дослідження комплексного впливу поліфенолів червоного винограду сьогодні стають надзвичайно важливими.

Морфологічні методи

Як в контрольній, так і в експериментальній групах вимірювали масу тіла та окружність живота для підтвердження абдомінального ожиріння. Крім того, вагу печінки та нирок, морфологічне дослідження названих органів проводили після евтаназії тварини.

Біохімічні аналізи

У глюкозі та основному рівні холестерину в сироватці крові вимірювали рівні ліпопротеїдів та тригліцеридів високої щільності для підтвердження РС.

Також вимірювання маркерів вільнорадикального окислення та антиоксидантів, а також маркерів запалення (неспецифічні протеїнази та їх інгібітори) проводили в сироватці крові та гемолізатах:

Всі дослідження проводились із обладнанням, що пройшло метрологічні випробування та експертне обстеження у відповідному центрі (Свідоцтво № 021/12 від 12.12.2012).

Статистичний аналіз

Статистичні дослідження проводили варіативними методами шляхом оцінки середнього арифметичного (M), похибки середнього арифметичного (m), параметричного тесту Стьюдента (t). Достовірними були дані, що при P Control - контрольна група; МС - група з моделюючим метаболічним синдромом; MS + ”Enoant” - група з моделюючим метаболічним синдромом, що коригує за допомогою “Enoant”; MS + ”Enoant-Premiym” - група з моделюючим метаболічним синдромом, що коригує за допомогою “Enoant-Premium”; МС + ”Фенокор” - група з моделюючим метаболічним синдромом, що коригує за “Фенокором”.
TBA-AP, кількість активних продуктів тіобарбітурової кислоти; CC, концентрація церулоплазміну; СОД, супероксиддисмутазна активність; nmolMDA/мл - концентрація діальдегіду малону в наномолі на мл; Од/мл, одиниця інгібіторів на 1 мл.
р

Рисунок 2. Динаміка активності протеолітичних ферментів та їх інгібіторів у щурів з експериментальною РС.
Контроль - контрольна група; МС - група з моделюючим метаболічним синдромом; MS + ”Enoant” - група з моделюючим метаболічним синдромом, що коригує за допомогою “Enoant”; MS + ”Enoant-Premiym” - група з моделюючим метаболічним синдромом, що коригує за допомогою “Enoant-Premium”; МС + ”Фенокор” - група з моделюючим метаболічним синдромом, що коригує за “Фенокором”.
TLA, трипсиноподібна активність; ELA, активність, схожа на еластазу; АТА, альфа-1-антитрипсинова активність; ASA, кислотостійкі інгібітори; мкгМ/мл • хв, активність у мікрограмах в 1 Моль на 1 мл за 1 хвилину; Од/хв, одиниці інгібіторів на хвилину.
р

Таблиця 1. Склад поліфенолів в експериментальних зразках концентратів, вироблених з червоного винограду ( М ± м )

Всього антоціанів, г/дм 3

Флаван-3-оли, г/дм 3

Оксикинатна кислота, г/дм 3

Оксибензойні кислоти, г/дм 3

Проантоціанідини, г/дм 3

- Загальна кількість фенольних речовин (за допомогою ВЕРХ), г/дм 3

- Загальна кількість фенольних речовин (Фолін-Ціокальтеу), г/дм 3

- Антиоксидантна активність (тролокс), г/дм 3

Серцево-судинна патологія є основною причиною загальної світової смертності і вважається результатом поєднаних кардіологічних та метаболічних факторів ризику [31]. Коли кількість названих факторів існує в організмі одночасно, вони сприяють розвитку РС, що збільшує, у своєму терміні, можливість серцево-судинної патології. Доведено, що основною причиною РС є ожиріння, тоді як патогенез РС заснований на активації PLO, прозапальних впливах та ендогенній інтоксикації [32, 33].

Отримані нами результати показали, що у групі тварин з РС спостерігався дисбаланс в AOS-HEOX. Останнє може бути пов’язане з аліментарним ожирінням. Основним показником активації PLO було підвищення TBA-AP разом зі зміною антиоксидантного статусу. Це відповідає пізнішим даним про збільшення діальдегіду малону при РС [33]. Активація ООП супроводжувалася зниженням CLA, PLA та SOD, тоді як CC була підвищена, що можна оцінити як відповідь на активацію PLO.

Одночасно з AOS-HEOX вивчалася активність PIN. Зв'язок PLO та PIN у MS є актуальною проблемою через позитивну кореляцію між активністю металопротеїназ та активними формами кисню. Активні форми кисню, здається, є промоторами протеаз і, отже, чинниками поліпшення запального процесу [34]. Наше дослідження виявило надійну позитивну кореляцію між активністю неспецифічних протеаз та окружністю живота, що вказувало на те, що РС сприяв синтезу активних прозапальних факторів, які ініціювали синтез протеаз. Отже, як літературні дані, так і результати нашого дослідження дозволили припустити, що гіперактивація PLO ініціює і PIN підтримує та посилює метаболічні порушення, роблячи порочне коло як гуморальних, так і клітинних подій.

Отримано 15 листопада 2017 р., Переглянуто 4 вересня 2018 р., Прийнято 9 вересня 2018 р