Антитіло до фосфо-PBK/TOPK (Thr9) # 4941

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин HT29, необроблених або оброблених нокодазолом (50 нг/мл), з використанням антитіл Phospho-PBK/TOPK (Thr9) (верхній) або PBK/TOPK-антитіл # 4942 (нижній).

Антитіло до фосфо-PBK/TOPK (Thr9) 4941

Ваш місцевий представник
Ваша інформація про місцеві покупки
Гарантія антитіл
FAQ
Технічна підтримка

Супровідні дані
Супутні товари
Використання продукту
Протоколи
Передумови
Шляхи та білки
Цитати та відгуки

Супровідні дані

РЕАКТИВНІСТЬ	H
ЧУТЛИВІСТЬ	Ендогенні
МВт (кДа)	40
ДЖЕРЕЛО	Кролик

Ключ програми:

W-Західний
IP-Імунопреципітація
IHC-Імуногістохімія
ЧІП-Імунопреципітація хроматину
ЯКЩО-Імунофлюоресценція
F-Проточна цитометрія
E-P-ІФА-пептид

Ключ перехресної реактивності виду:

H-Людина
М-Миша
Р.-Щур
Хм-Хом'як
Mk-Мавпа
Мі-Норка
C.-Курка
Дм-D. melanogaster
X-Ксенопус
Z-Данио
B-Бичачий
Dg-Пес
Стор-Свиня
Доктор-S. cerevisiae
Се-C. elegans
Хр-Кінь
Всі-Очікуються всі види

Антитіло PBK/TOPK # 4942

Набір пробовідбірників антитіл для визначення фази клітинного циклу # 17498

Набір для відбору проб антитіл Phospho-p53 # 65390

Фосфо-cdc2 (Tyr15) (10A11) Кролячий mAb # 4539

cdc2 (POH1) Миша mAb # 9116

cdc2 (E1Z6R) Кролячий mAb # 28439

Cyclin B1 (D5C10) XP ® Rabbit mAb # 12231

Антитіло до фосфо-cdc2 (Thr161) # 9114

Антитіло до фосфо-cdc2 (Thr14) # 2543

Фосфо-Chk1 (Ser345) (133D3) Кролячий mAb # 2348

Інформація про використання продукту

Зберігання

Поставляється в 10 мМ HEPES натрію (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 100 мкг/мл BSA та 50% гліцерину. Зберігати при –20 ° C. Не аліквотуйте антитіло.

Протокол

Вестерн-протокол промокання

Для вестерн-блоттингу інкубуйте мембрану з розведеним первинним антитілом у 5% мас./Об. BSA, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 при 4 ° C з легким струшуванням протягом ночі.

ПРИМІТКА: Будь ласка, зверніться до веб-сторінки первинного продукту антитіл щодо рекомендованого розведення антитіл.

А. Розчини та реагенти

Від підготовки зразка до виявлення, реагенти, необхідні для вашого Western Blot, тепер знаходяться в одному зручному наборі: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

ПРИМІТКА: Приготувати розчини з деіонізованою зворотним осмосом (RODI) або рівноцінною водою.

B. Зміщення білків

Загальний протокол підготовки зразків.

Обробляйте клітини, додаючи свіжий носій, що містить регулятор протягом бажаного часу.
Аспіратні засоби масової інформації з культур; промити клітини 1X PBS; аспірувати.
Лізують клітини шляхом додавання 1X буфера зразка SDS (100 мкл на лунку 6-лункової пластини або 500 мкл для пластини діаметром 10 см). Негайно зішкребіть клітини з пластини і перенесіть екстракт у пробірку для мікроцентрифуги. Тримайся на льоду.
Ультразвук протягом 10–15 с для завершення лізису клітин та зсуву ДНК (для зменшення в’язкості зразка).
Нагрійте 20 мкл зразка до 95-100 ° C протягом 5 хв; прохолодно на льоду.
Мікроцентрифуга протягом 5 хв.

Завантажте 20 мкл на гель SDS-PAGE (10 см x 10 см).

ПРИМІТКА: Рекомендується завантаження попередньо фарбованих маркерів молекулярної маси (# 13953, 5 мкл/смуга) для перевірки електротрансферу та біотинільованих білкових драбин (# 7727, 10 мкл/смуга) для визначення молекулярних ваг.

Електротрансфер на нітроцелюлозну мембрану (# 12369).

C. Блокування мембрани та інкубації антитіл

ПРИМІТКА: Обсяги для 10 см х 10 см (100 см 2) мембрани; для мембран різного розміру відповідно регулюйте гучність.

I. Блокування мембрани

(Необов’язково) Після перенесення промийте нітроцелюлозну мембрану 25 мл TBS протягом 5 хв при кімнатній температурі.
Інкубуйте мембрану в 25 мл блокуючого буфера протягом 1 години при кімнатній температурі.
Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.

II. Первинна інкубація антитіл

Інкубуйте мембрану та первинне антитіло (при відповідному розведенні та розчиннику, як рекомендовано на веб-сторінці продукту) у 10 мл первинного буфера для розведення антитіл, обережно перемішуючи протягом ночі при 4 ° C.
Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
Інкубуйте мембрану з анти-кролячим IgG, зв'язаним з HRP антитілом (# 7074 на 1: 2000) та антибіотином, зв'язаним з HRP-антитілом (# 7075 на 1: 1000–1: 3000) для виявлення біотинільованих білкових маркерів у 10 мл блокуючий буфер з легким перемішуванням протягом 1 години при кімнатній температурі.
Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
Продовжуйте виявлення (Розділ D).

D. Виявлення білків

Вказівки щодо використання:

Промийте зв’язаний з мембраною HRP (кон’югат антитіл) тричі протягом 5 хвилин у TBST.
Приготуйте 1X реагенту SignalFire ™ ECL (# 6883), розбавивши одну частину 2X реагенту A та одну частину 2X реагенту B (наприклад, для 10 мл додайте 5 мл реагенту A та 5 мл реагенту B). Добре перемішати.
Інкубуйте субстрат з мембраною протягом 1 хвилини, видаліть надлишок розчину (мембрана залишається вологою), оберніть пластиком і піддайте рентгенівській плівці.

* Уникайте повторного впливу на шкіру.

розміщено в червні 2005 року

переглянуто в червні 2020 року

Специфічність/Чутливість

Фосфо-PBK/TOPK (Thr9) Антитіло виявляє ендогенні рівні PBK/TOPK лише при фосфорилюванні на треоніні 9.

Видова реактивність:

Джерело/Очищення

Поліклональні антитіла виробляються імунізацією тварин синтетичним фосфопептидом, що відповідає амінокислотам навколо Thr9 людського PBK/TOPK. Антитіла очищають за допомогою білка А та афінної хроматографії.

Передумови

PBK/TOPK - це серин/треонінкіназа, яка фосфорилюється та активна під час мітозу (1). PBK/TOPK складається з піддоменів кінази та карбокси-кінцевого домену, що зв'язує PDZ, який, як вважають, взаємодіє з білком супресором пухлини hDlg (1). Підвищена експресія PBK/TOPK спостерігається у високопроліферативних злоякісних клітинних лініях, і експресія PBK/TOPK сильно регулюється під час термінальної диференціації лейкозних клітин HL-60 (2,3). Індукована РМА активність кінази щодо PBK/TOPK спостерігалася (4), а також було показано, що cdc2/cyclinB фосфорилює PBK/TOPK in vitro, імовірно, при Thr9 (1). Потенційні основи PBK/TOPK включають p38 MAPK та c-Myc (3,4).

Шляхи та білки

Дослідіть шляхи + білки, пов’язані з цим продуктом.