Зміни в харчуванні жиру, що змінюють рівні плазми окислених ліпопротеїдів низької щільності та ліпопротеїнів (а)

Від кафедри внутрішньої медицини та біоцентру Оулу (M.-L.S., M.R., Y.A.K., S.H.), Університет Оулу, Оулу, Фінляндія; Національний інститут охорони здоров’я (G.A., A.A.), Mannerheimintie, Гельсінкі, Фінляндія; і кафедра медицини (J.L.W.) Каліфорнійського університету Сан-Дієго, Ла-Холла, Каліфорнія.

Ви переглядаєте останню версію цієї статті. Попередні версії:

Анотація

Завдання— Оцінити вплив дієтичних модифікацій на окислений ліпопротеїн низької щільності (ЛПНЩ).

Існує значний інтерес до фармакологічних засобів та антиоксидантів, які зменшують окислення ЛПНЩ in vitro 7–9 та зменшують атеросклероз на моделях тварин in vivo. 10 Дані про людей, в першу чергу про вітамін Е, невтішні, хоча причини цього нещодавно обговорювались. 11 Інтерес також був зосереджений на нефармакологічних засобах та антиоксидантах, таких як натуральні продукти харчування, та їх здатності впливати на окислення ЛПНЩ. 12,13 Дані про вплив цілісних дієт з високим споживанням фруктів та овочів на окислення ЛПНЩ обмежені та суперечливі. 14–16

У цьому дослідженні ми досліджували, як зміни в дієтичному споживанні жиру, овочів, ягід та фруктів впливали на рівень антиоксидантів та OxLDL у плазмі крові. Ми провели перехресне дієтичне втручання з двома дієтами, обидві з низьким вмістом жиру, але одна з овочами, а інша - з овочами, ягодами та фруктами, щоб з’ясувати, чи впливає велике споживання природних антиоксидантів на рівень плазми крові. OxLDL.

Методи

Предмети

Ми опитали та обстежили 86 жінок, серед яких було відібрано 37 здорових добровольців та завершено дослідження. Критеріями включення були: (1) індекс маси тіла (ІМТ) від 20 до 29 кг/м 2; (2) глюкоза в крові від 3,7 до 6,2 ммоль/л; (3) холестерин в плазмі

Фігура 1. Дизайн дослідження.

Дієти

Плазмові ліпіди та ліпопротеїни (а)

Загальну концентрацію триацилгліцерину та холестерину в плазмі крові визначали ферментативно за допомогою специфічного аналізатора клінічної хімії (набори Boehringer Mannheim, GmbH, Німеччина). Опадання плазми гепарину та марганцю хлоридом використовувалось для вимірювання холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛПВЩ). 18 Концентрацію холестерину ЛПНЩ розраховували за формулою Фрідевальда. 19 Концентрації Lp (a) у плазмі крові визначали комерційним імуноферментним методом (Biopool Ltd) відповідно до інструкцій виробника.

Аутоантитіла до окисленого ЛПНЩ

Рівні аутоантитіл IgM та IgG, що зв’язуються з OxLDL міді (CuOx-LDL), визначали у зразках плазми методом ІФА на основі хемілюмінесценції. 20 CuOx-LDL генерували, як описано. 3 антигени додавали при 10 мкг/мл у PBS-EDTA (PBS з 0,27 ммоль/л EDTA, рН 7,5) та інкубували протягом ночі при 4 ° C. Зразки плазми розводили 1: 1000 для IgM і 1: 500 для IgG, і кількість зв’язаного імуноглобуліну визначали за допомогою лужної фосфатази, міченої козячим IgM проти людини (Sigma) або козячого IgG проти людини (Sigma), використовуючи Lumi-Phos 530 (Lumigen) як субстрат. Люмінесценцію визначали за допомогою люмінометра Віктора 2 (Wallac, PerkinElmer).

Чутлива CRP

Для вимірювання чутливої СРБ використовували два різних моноклональних антитіла до людської CRP миші (HyTest Ltd) та очищений CRP людини (HyTest Ltd). Коротко кажучи, антитіла до людського CRP покривали 2 мкг/мл у буфері PBS протягом ночі при 4 ° C. Зразки плазми розводили у співвідношенні 1: 2000, і кількість зв’язаного СРБ визначали за допомогою біотинільованих антитіл до СРБ людини. Комерційний контрольний зразок CRP (Roche) включався до кожного аналізу.

Окислений ЛПНЩ

Для вимірювання окисленого в плазмі ЛПНЩ використовували сендвіч-хемілюмінесцентний імуноаналіз із використанням добре охарактеризованого мишачого моноклонального антитіла EO6, яке специфічно зв'язується з окисленими фосфоліпідами. 20,21 Спочатку моноклональне анти-аполіпопротеїнове В-100 антитіло, MB47, висівали при 5 мкг/мл протягом ночі при 4 ° С. Зразки плазми розбавляли до 1:50 і вимірювали кількість окислених фосфоліпідних епітопів за допомогою біотинільованих антитіл EO6. В паралельних лунках кількість зв’язаного ЛПНЩ визначали за допомогою поліклональних біотинільованих анти-апоВ антитіл. Результати виражаються як кількість зв’язаного EO6, поділене на кількість зв’язаного в лунки анти-apoB, отримуючи відносну кількість окисленого фосфоліпіду, виявленого EO6/apoB-100 (OxLDL-EO6). Це вимірювання нормалізує вміст окисленого фосфоліпіду в частині apoB-100.

Аналіз плазмових токоферолів, каротиноїдів та вітаміну С

Плазмові концентрації токоферолів 22 та каротиноїдів 23 аналізували за допомогою ВЕРХ. Загальну аскорбінову кислоту визначали за допомогою автоматизованого флуорометричного методу з використанням ортофенілендіаміну. 24 Для цього вимірювання 4,5 мл 5% метафосфорної кислоти додавали до 0,5 мл плазми протягом 1 години після венепункції і зберігали при -70 ° C.

Дієтичний аналіз

Базове споживання дієти було розраховано на основі 4-денних записів про їжу за допомогою програмного забезпечення Nutrica (Інститут соціального страхування, Гельсінкі, Фінляндія) на основі фінської бази даних поживних речовин. Вміст поживних речовин у дієтах для втручання аналізували у Фінляндійському дослідницькому центрі сільського господарства. Харчові порції обох дієт збирали щодня під час втручання на одному енергетичному рівні (7,5 МДж) і зберігали при -20 ° C до аналізу. Перед аналізом зразки розморожували та об'єднували для кожного періоду дієти. Аналіз включав загальну енергію, загальний вміст жиру, вуглеводів, клітковини, жирних кислот, 25 харчових холестерину, калію, натрію, кальцію, заліза, α-каротину, 26 β-каротину, 26 аскорбінової кислоти (вітамін С), 27 та α-токоферолу . 28

Статистичний аналіз

Тест Сафіро-Вілька був використаний для перевірки нерівності розподілів. Каротиноїди плазми, тригліцериди, OxLDL-EO6, чутливий CRP та Lp (a) зазвичай не розподілялись; тому використовували непараметричні тести. Спочатку відмінності були перевірені за допомогою тесту Фрідмана для повторних вимірювань, а потім за допомогою підписаного рангового тесту Вілкоксона. Змінні виражаються як медіани з найменшими та найвищими квартилями. Загальний холестерин, холестерин ЛПНЩ, холестерин ЛПВЩ, вітамін С та вітамін Е, які зазвичай розподілялись, були перевірені студентом т тесту і виражаються як середнє значення ± SD. Кореляції визначали за допомогою коефіцієнтів кореляції Спірмена та Пірсона. Усі відмінності вважалися значними на рівні 5%. Для статистичного аналізу була використана комп'ютерна програма SPSS (9,0; SPSS Inc).

Результати

Зміст поживних речовин у дієтах

Основні відмінності між базовою дієтою та дослідною дієтою полягали в кількості та якості харчового жиру та в кількості споживаних овочів, ягід та фруктів. Обидві досліджувані дієти мали менше загального жиру, ніж вихідна дієта (таблиця). Крім того, між періодами дієти спостерігались незначні зміни в якості харчового жиру. Кількість насичених жирних кислот (SAFA) та мононенасичених жирних кислот була нижчою в обох досліджуваних дієтах порівняно з вихідними дієтами суб'єктів. Кількість поліненасичених жирних кислот (ПНЖК) зросла, особливо у відповідь на дієту з низьким вмістом жиру та високим вмістом рослинних продуктів (таблиця).

Середнє щоденне споживання поживних речовин жінками (n = 37) у базовий період та середній вміст поживних речовин у дієтах дослідження

Індекс маси тіла

Середній ІМТ обстежуваних становив 23,7 ± 2,2 кг/м 2 на вихідному рівні. На кінець дієти з низьким вмістом жиру та з низьким вмістом рослинної їжі та дієти з низьким вмістом жиру з високим вмістом овочів середній ІМТ обстежуваних становив 23,3 ± 3,2 кг/м 2 та 23,3 ± 3,3 кг/м 2 відповідно.

Плазмові ліпіди

Загальний рівень холестерину та тригліцеридів у плазмі крові та рівень холестерину ЛПВЩ дещо знизилися у відповідь на дієту з низьким вмістом жиру та високим вмістом рослинних продуктів (рис. 2). Цікаво, що дієта з низьким вмістом жиру і низьким вмістом овочів не впливала на загальний рівень холестерину, але знижувала загальний рівень тригліцеридів і холестерину ЛПВЩ у плазмі крові.

Малюнок 2. Плазмові концентрації загального холестерину, ЛПВЩ та ЛПНЩ та тригліцеридів усіх досліджуваних (n = 37) під час дослідницьких дієт. Тот-Чол вказує на загальний рівень холестерину; ТГ, тригліцериди; ЛПВЩ-хол, холестерин ЛПВЩ; LDL-хол, холестерин LDL. *P

Рівні антиоксидантів плазми

Рівень кількох антиоксидантів у плазмі збільшився у відповідь на дієту з низьким вмістом жиру та високим вмістом рослинних продуктів (рис. 3). Рівні α-каротину, β-каротину, β-криптоксантину та лютеїн-зеаксантину в плазмі збільшились> у 2 рази під час дієти з низьким вмістом жиру та високим вмістом рослинних рослин порівняно з початковою дієтою (рис. 3). Однак дієта з низьким вмістом жиру та з низьким вмістом овочів містила досить однакову кількість антиоксидантів у порівнянні зі звичайним повсякденним харчуванням випробовуваних; отже, менші зміни відбувались у рівнях антиоксидантів у плазмі крові між базовою і низькожировою дієтою з низьким вмістом рослин.

Малюнок 3. Концентрація каротиноїдів, вітаміну С та альфа-токоферолу в плазмі у всіх досліджуваних (n = 37) під час дієт. Значення є середніми ± SD. *P

На початковому рівні концентрація лютеїну – зеаксантину в плазмі корелювала з плазмою OxLDL (р= 0,44, P 20,21 Ми використовували моноклональні антитіла EO6-детектуючі окислені фосфоліпідні епітопи, щоб оцінити, чи досліджувані дієти впливатимуть на кількість окислених епітопів у частинках apoB-100 досліджуваних. Порівняно з вихідними рівнями, медіана рівня OxLDL-EO6 у плазмі збільшилася на 27% (Q1, Q4: -14, 67) (P

Малюнок 4. Відносні середні зміни плазмових концентрацій окисленого ЛПНЩ (ліворуч) та ліпопротеїну (а) (праворуч) усіх досліджуваних (n = 37) від вихідного рівня до нежирного, з низьким вмістом жиру та від вихідного рівня до рівня жиру, високорослинна дієта.

Ще одним напрямком досліджень, що шукають фактори, що впливають на окислювальну сприйнятливість ЛПНЩ, є ті, хто вивчає харчовий жир. Відомо, що дієти з високим вмістом SAFA підвищують загальний рівень холестерину в плазмі, тоді як дієти з високим вмістом PUFA мають переважно сприятливий вплив на ліпідні профілі плазми: зменшення загального рівня та холестерину LDL, а також зниження рівня холестерину HDL. 34 Наприклад, коли лінолева кислота замінює SAFA у дієті, це знижує рівень холестерину в сироватці крові. Незважаючи на такий сприятливий вплив ненасичених жирів на ліпідні профілі, існує занепокоєння, що такі дієти можуть збільшити сприйнятливість ЛПНЩ до окислення, тим самим заперечуючи деякі їхні кардіопротекторні ефекти. Попередні дослідження показують, що дієти з високим вмістом лінолевої кислоти призводять до частинок ЛПНГ, збагачених лінолевою кислотою, які, як вважають, є більш сприйнятливими до перекисного окислення ліпідів, а також більш атерогенними. 36 У нашому дослідженні, коли суб'єкти споживали досліджувані дієти, споживання загального жиру було зменшено, а SAFA частково замінено PUFA порівняно з вихідною дієтою. Кількість ПНЖК було особливо збільшено у відповідь на дієту з низьким вмістом жиру і високим вмістом рослин.

Залишається питання, чому рівень Lp (a) збільшився у відповідь на зміни в харчуванні. Базальні рівні Lp (a) в першу чергу генетично детерміновані, але деякі дані свідчать про те, що Lp (a) може діяти як реагент гострої фази в деяких ситуаціях. 40 У попередньому дослідженні було встановлено, що дієта з високим вмістом SAFA дає приблизно на 10% нижчу концентрацію Lp (a) у плазмі, ніж дієта з високим вмістом олеїнової кислоти або транс-жирних кислот. 41 Це спостереження узгоджується з нашим дослідженням, згідно з яким обидві дієти призвели до зниження рівня SAFA і, як наслідок, до рівня Lp (a).

На закінчення ми виявили, що дієта, яка традиційно вважається антиатерогенною (з низьким вмістом насичених жирів, високою кількістю поліненасичених жирів та природних антиоксидантів), підвищує рівень циркулюючих окислених ЛПНЩ та Lp (а) у плазмі крові. Питання про те, чи є зміни, що спостерігаються в цьому дослідженні, насправді є проатерогенними чи антиатерогенними, залишається вирішеним.