Вплив годівлі на гематологічний та плазмовий біохімічні профілі зеленого кольору (Chelonia mydas) та Ремлі Кемпа (Lepidochelys kempii) Морські черепахи

1 Відділ клінічних наук, Коледж ветеринарної медицини, Університет штату Північна Кароліна, Ролі, штат Північна Кароліна 27606, США

вплив

2 Центр морських наук і технологій, Університет штату Північна Кароліна, місто Морхед, NC 28557, США

3 Департамент навколишнього середовища та природних ресурсів Північної Кароліни, Відділ морського рибальства, місто Морхед, NC 28557, США

4 Центр порятунку та реабілітації морських черепах Карен Бізлі, Острів Топсейл, Північна Кароліна, 28445, США

Анотація

У ссавців ліпемічна кров, яка надто швидко відбирається після годування тварини, може мати значний вплив на біохімічні показники. Біохімічні показники плазми у плазунів можуть впливати на види, вік, сезон та стан харчування. Однак при відборі крові плазунів статус голодування зазвичай не враховується. У цій роботі ми оцінили 2-годинний збір крові після їжі у двох видів морських черепах, щоб дослідити вплив годування на гематологічні та плазмові біохімічні показники. Годування не мало суттєвого впливу на гематологічні показники жодного з видів, а також не впливало на показники біохімії плазми у морських черепах Кемпа. У зелених черепах після їжі загальний білок, альбумін, ALP, AST, ALT, амілаза та холестерин значно зросли, а хлорид значно зменшився. Незважаючи на те, що спостерігались статистично значущі зміни, медіана процентних різниць між значеннями до і після їжі не перевищувала 10% для жодного з цих аналітів і, ймовірно, не змінила б клінічної інтерпретації.

1. Вступ

Зелені морські черепахи (Chelonia mydas) зустрічаються в тропічних та напівтропічних водах світу і є другою за чисельністю морською черепахою, виявленою біля Східних Сполучених Штатів [1, 2]. Неповнолітні зелені черепахи, знайдені в прибережних водах, перебувають у фазі переходу від більш м’ясоїдного раціону (креветки, равлики та ктенофори) до переважно рослиноїдної їжі (морські трави), що створює фізіологічний статус, унікальний для інших морських черепах [3]. Морські черепахи КемпаLepidochelys kempii) є найменшими та найбільш зникаючими з усіх морських черепах. Вони зустрічаються у водах уздовж східного узбережжя Північної Америки, починаючи від Мексики і закінчуючи північ до Нью-Йорка та Массачусетсу [2]. Чарівні черепахи Кемпа хижі та умовно-патогенні, живляться переважно крабами, молюсками та рибою [3]. Неповнолітні зелені черепахи Кемпа використовують мілкі прибережні води для видобутку кормів, роблячи їх сприйнятливими до ряду травм, спричинених людиною (наприклад, страйк човна та взаємодія риболовлі) та природних процесів хвороб (наприклад, приголомшення холодом). Щороку сотні неповнолітніх черепах виявляються мертвими або сильно ослабленими, багато з них потрапляють у реабілітаційні центри для лікування.

Гематологія та біохімія плазми є цінними для моніторингу здоров'я тварин; однак екологічні та процедурні фактори можуть мати різний вплив на повідомлені значення. Збір крові після їжі може дати ліпемічні зразки через збільшення рівня тригліцеридів у сироватці крові у вигляді хіломікронів. Деякі біохімічні аналіти змінюються з раціоном, годуванням та ліпемією у широкого кола видів, включаючи ссавців [4–13], птахів [14–19], акул [20] та плазунів [21, 22]. Спостережувані зміни біохімічних показників призвели до рекомендацій щодо часу префлеботомії натще для багатьох видів [4, 6, 17, 19]. Однак мало рекомендацій щодо плазунів.

У плазунів фактори навколишнього середовища та фізіологічні, включаючи сезон, стать, вік, розмір та стан харчування, можуть змінювати значення клінічної патології [22–24]. У морських черепах гематологічні та біохімічні показники плазми досліджені для кількох видів [21, 25–34], а біохімічні показники мають вплив на стать, розмір, вік, стан здоров’я та харчування [21, 31, 34]. –37]. Однак існує мало даних щодо впливу відбору проб після їжі на аналіти плазмової хімії у морських черепах, що призводить до невизначеності потреби у зразках крові натще.

Розуміння того, чи, чи, як годування впливає на значення клінічної патології у морських черепах, було б корисним як у неволі, так і в диких умовах через велику невизначеність у знанні, коли дика черепаха востаннє годувалась, та випадкові труднощі, що стосуються збору зразків у процедурах управління та логістиці реабілітаційний або акваріумний заклад. Це дослідження оцінювало вплив відбору проб після прийому їжі на гематологічні та плазмові біохімічні показники у зелених морських черепах Кемпа.

2. Матеріали та методи

2.1. Тварини та довкілля

Для цього дослідження було використано десять неповнолітніх зелених морських черепах та десять неповнолітніх морських черепах Кемпа, які проходять реабілітацію при різних станах у Центрі порятунку та реабілітації морських черепах Карен Бізлі, острів Топсейл, Північна Кароліна. Медіана та діапазон ваг, прямі довжини панциря (від нухальної до пігальної) та дні реабілітації наведені в таблиці 1. Були включені лише черепахи, які були активними, добре харчувалися та не застосовували жодних основних процедур. Не всіх вважали готовими до звільнення, оскільки деякі все ще лікувались від незначних уражень оболонки (місцеве лікування) та перебування у бажаних умовах для звільнення. Черепахи розміщувались окремо в пластикових або склопластикових ємностях різного розміру, що містять відфільтровану солону воду. Більші резервуари були підключені до системи загальної фільтрації з різними формами механічної та біологічної фільтрації; менші резервуари були на щоденній звалищі та заповнюванні. Більшість черепах залишалися в закритих резервуарах, але декілька розміщувались у тимчасових вольєрах у другій половині дня, щоб полегшити щоденну роботу реабілітаційного центру та забезпечити вплив УФ-світла. Температура води коливалася від 25 ° C до 29 ° C.

) і Кемп

) морські черепахи досліджували вплив годівлі на гематологічні та біохімічні профілі плазми.

2.2. Відбір проб та годівля
2.3. Переробка та аналіз крові

Для кожної черепахи робили два мазки крові, заповнювали дві пробірки з гематокритом, а решту крові поміщали в стерильний конічний флакон об'ємом 1,5 мл без добавки (Fisher Scientific Company, Пітсбург, Пенсільванія, США) на мокрий лід до центрифугування. Всі зразки центрифугували протягом 67 хв після забору. Пробірки з гематокритом центрифугували при 3900 × g протягом 5 хв і визначали об'єм упакованих клітин (PCV). Загальну кількість твердих речовин (TS) визначали рефрактометром. Конічні флакони центрифугували при 1000 × g протягом 10 хв і збирали плазму. Зразки плазми разом з двома відповідними мазками крові були передані в комерційну діагностичну лабораторію (Antech Diagnostics, Мемфіс, штат Теннесс, США) для біохімічного аналізу та диференціальної кількості клітин крові протягом однієї доби після забору. Панелі біохімії плазми проводили на автоаналізаторі Hitachi 717 Chemistry (Hitachi Instruments Inc., Сан-Хосе, Каліфорнія, США). Детальна інформація про методологію біохімічного аналізу плазми узагальнена в іншому місці [39].

2.4. Статистичний аналіз

Всі аналізи проводили за допомогою JMP 7 (SAS Institute, Cary, NC, USA). Медіану та діапазон визначали для всіх гематологічних та плазмових біохімічних даних. Тест підписаних рангових пар Вілкоксона був використаний для порівняння відмінностей між значеннями перед прийомом їжі та після прийому їжі. Далі дані групували за гематологічними значеннями (PCV,% гетерофілів,% лімфоцитів,% моноцитів,% еозинофілів та% базофілів), ферментів плазми (ALP, AST, ALT, CPK, амілаза та ліпаза), метаболічних показників (загальний білок, альбумін, глобуліни, глюкоза, BUN, креатинін, сечова кислота, холестерин, тригліцериди та загальний білірубін) та іони (натрій, калій, хлорид, кальцій, неорганічний фосфат та магній), а послідовна техніка Бонферроні застосовувалася в кожному групи, щоб зменшити ймовірність помилки типу I [40]. A

), лужна фосфатаза (ALP;

), аланінамінотрансфераза (ALT;), аспартатамінотрансфераза (AST;

), амілази () та холестерину (). Крім того, спостерігалося значне зниження рівня хлоридів (

). З цих аналітів, які статистично відрізнялися після годування, жоден з них не мав медіанної різниці у відсотках більше 10% між зразками до і після їжі (табл. 4). Незважаючи на те, що середні процентні відмінності були більшими за 10% для глобуліну та креатинкінази (КК) у зелених черепах, а також для ліпази та сечової кислоти у черепахи Кемпа, варіабельність даних була великою, і ці відмінності не були статистично значущими.

). Надано систему International та умовні одиниці (у дужках).

). Надано систему International та умовні одиниці (у дужках).

) і Кемп

4. Обговорення

Усі гематологічні та біохімічні показники для обох видів морських черепах узгоджувались із попередньо повідомленими значеннями для цих видів [25, 30, 31, 35, 41–43], за винятком неорганічних фосфатів, AST та ALT у зелених черепах. Неорганічний фосфат знаходився у верхньому діапазоні або трохи перевищував вказані значення [25, 30, 35, 41, 43], що, ймовірно, пов’язано з дієтою. Помітне підвищення рівня АСТ та АЛТ більшості зелених черепах, порівняно із зафіксованими значеннями, є явищем, яке раніше спостерігалось у цієї популяції (неопубліковані дані). Основна причина невизначена, але вона також може мати дієтичне походження, пов’язана з більш м’ясоїдною дієтою в неволі. Оскільки значення після їжі порівнювали із значеннями перед їжею для кожної черепахи, початкові значення не були фактором аналізу.

Істотних відмінностей між препрандіальними та постпрандіальними гематологічними показниками не було виявлено ні для зеленої черепахи, ні для морської черепахи Кемпа. Цей результат був очікуваним, оскільки відбір зразків після їжі пов'язаний з ліпемією та втручанням у аналіти, які використовують фотометричний аналіз [4, 5, 12, 44]. Гематологічні значення отримують шляхом прямої мікроскопічної оцінки кількості та типу клітин; тому змін, обумовлених відбором проб після їжі, не очікується. Ліпемія також була пов'язана з посиленим гемолізом через крихкість еритроцитів [4]; однак у жодному із використаних зразків гемолізу майже не спостерігалося.

Зелена морська черепаха показала більше змін у хімічних показниках плазми після їжі, ніж у морської черепахи Кемпа. У зеленій черепасі загальний білок, альбумін, ALP, AST, ALT, холестерин та амілаза суттєво зросли після годування, але жодна з них не змінилася до такої міри, яка могла б призвести до змін у медичному управлінні. У морської черепахи Кемпа не було значних відмінностей між зразками до і після їжі. Відмінності між двома видами можуть стосуватися відмінностей у їхньому природному харчуванні. Неповнолітні черепахи Кемп хижі, вони споживають переважно ракоподібних [3], тоді як неповнолітні зелені черепахи переходять від м’ясоїдного до більш рослиноїдного способу життя [3, 45]. Однак у рамках реабілітації в рамках поточного дослідження обидва види в основному годуються мойвою з кількома кальмарами, а багатьох загадків Кемпа також годують синім крабом із м’якою оболонкою. Тоді спостерігається різниця може бути пов’язана зі спеціалізованою фізіологією кожного виду для їх природного раціону (тобто включення рослинності в раціон неповнолітніх зелених черепах такого розміру). Необхідними є дослідження впливу природних дієт на біохімічні профілі плазми на різних етапах життя.