Тетрамізол

Пов’язані терміни:

Тіонілхлорид
Антигельмінтний засіб
Левамізол
Личинка
Агар
Агароза
Амін
Епоксид
Оцтовий ангідрид
Хітиназа

Завантажити у форматі PDF

Про цю сторінку

Підходи до проектування та синтезу протипаразитарних препаратів

Сатьяван Шарма, Нітья Ананд, у Бібліотеці фармакохімії, 1997

4.2.1 Тетрамізол

Встановлено, що тетрамізол є високоефективним проти Ascaris lumbricoides у людей. Доведено, що при одноразовій пероральній дозі 3-8 мг/кг препарат виліковує 79-100% частот з високим зниженням кількості фекальних яєць. Рекомендована доза тетрамізолу при аскаридозі становить 50-80 мг/дитині та 100-150 мг/дорослій [1,50,51]. Тетрамізол також дає лікування до 75% проти інфекцій анкілостомоз в людини у дозі 2,5-5 мг/кг, що дається щодня протягом 3 днів [50–52] .

Caenorhabditis elegans: Клітинна біологія та фізіологія

Лоїс Г. Едгар, Боб Гольдштейн, у Методи в клітинній біології, 2012

C Примітки

Додавання тетрамізолу (Sigma T1512, вихідний розчин 10 мг/мл у H2O, розведений приблизно до 100 мкг/мл у яєчних солях) є необов’язковим; цей препарат паралізує глистів і полегшує різання. Вирізайте негайно: якщо занадто скоротитися, черв’яки не виділять багато яєць. Щодня використовуйте свіжі леза скальпеля, оскільки вони швидко піддаються корозії. Надлишок тетрамізолу призведе до утворення осаду в розчині NaOCl.

Для досягнення максимального врожаю можна випустити більше яєць, обробляючи зрізаних черв’яків протягом приблизно 1 хв рівним об'ємом розчину NaOCl, доданого безпосередньо до краплі різання. Як тільки яйця виділяються, додайте той же об'єм EGM, що і NaOCl, який використовується для запобігання подальшому пошкодженню яєць. Це лікування вбиває пронуклеарні стадії та пошкоджує одноклітинні ембріони. 3-хвилинна обробка NaOCl все ще необхідна перед обробкою хітиназою для рівномірного травлення. Для яєць, які передують двоклітинну стадію, коли шкаралупа все ще є дещо проникною, додайте рівний об’єм EGM, як тільки глисти вирізаються. Після цього багато хто може пережити 3-хвилинну обробку NaOCl та хітиназою, а деякі все одно залишаться на одноклітинній стадії після обробки хітиназою та видалення оболонки вітелліну, якщо ви працюєте швидко.

Якщо перетравлення хітинази не працює протягом 8 хв, це, ймовірно, взагалі не спрацює. Найпоширенішими проблемами є гіпохлорит або фізіологічний стан глистів (здається, що перший день несучість дає більш жорсткі яйця). Гіпохлорит повинен бути партією, термін дії якої не закінчився, і зазвичай він стає бідним за місяць або близько того до закінчення терміну придатності. Зберігайте запас у холодильнику в темній вентиляційній пляшці, наповненій майже доверху. Змішайте 3-мл пробірку безпосередньо перед початком і тримайте її на льоду; він працюватиме близько 3 год, а потім повинен бути замінений.

Після ферментної обробки, особливо після проникнення, ембріони досить липкі і злипаються; це можна звести до мінімуму за допомогою піпетування одночасно або лише декількох за раз. Невеликі грудочки можна розбити, викинувши з піпетки з невеликим зусиллям кілька разів.

Піпетки для пермеабілізації витягуються вручну так само, як піпетки для перенесення, за допомогою ін'єкційних капілярів Kwik-fil (1B100F-4 від World Precision Instruments). Внутрішня нитка може допомогти вирізати конверт з вітелліну. Ідеальне натягування дає довге поступове звуження на тонкому ділянці, щоб його можна було вирізати до потрібного діаметру. Піпетки вирізають свіжим лезом скальпеля на Парафільмі під розсікаючим прицілом. Адаптер для ротової піпетки може бути виготовлений із малопрофільною трубкою Tygon, нарізаною на голку шприца, прикріплену до ротової трубки. Наповніть кінчик піпетки EGM назад до більш широкого отвору та проведіть тест на першій партії хітинованих ембріонів; обріжте кінчик піпетки, якщо він занадто малий. Ідеальний розмір буде залежати від віку ембріона, який ви намагаєтесь отримати; дуже ранні стадії більш крихкі і потребують трохи більшої свердловини; ембріони, розмір яких перевищує вісім клітин, стискаються з меншими пошкодженнями і часто виходять із більших піпеток із цілим оболонкою вітелліну. Такі непроникні ембріони продовжуватимуть розвиватися до етапу висиджування.

Використовуйте шприц на ротовій піпетці для наповнення та очищення пермеабілізаційних піпеток; фактична проникнення здійснюється тиском повітря в роті. Піпетки можуть сидіти на повітрі кілька годин, не висихаючи, оскільки отвір настільки малий, але в міру висихання вони з часом забиваються. Зберігайте піпетки (хорошу варто охороняти і триватиме кілька тижнів), кілька разів промивши наконечник дистильованою водою та підвісивши наконечник піпетки у пробірці стерильної дистильованої води або 0,1 М HCl, використовуючи стрічку "прапор" на піпеткою, щоб вона не занурилася повністю.

Якщо піпетка правильна, потрібно лише кілька хвилин, щоб просочити партію ембріонів, індивідуально всмоктуючи їх у піпетку та обережно виганяючи. Вони будуть стискатися більше або менше стискатись залежно від внутрішнього діаметра піпетки, але знову округлятись протягом декількох хвилин. Якщо при пермеабілізації відбувається багато лізису, або травлення було неповним, або отвір піпетки був занадто малим. Оскільки клітинні мембрани досить лабільні протягом 4–5 хв після початку цитокінезу, зародки, девітлінізовані під час і відразу після розщеплення, можуть лізувати або бластомери можуть злитися, пізніше зазнавши аномального тетраполярного розщеплення. Якщо це критично, перевірте під час експерименту та усуньте такі ембріони.

Дуже дрібні вії (традиційний інструмент електронної мікроскопії), закріплені на зубочистці за допомогою клею, є найбільш задовільним інструментом для швидкого ручного відділення бластомери; скляна голка також працює, але легко ламається. Вії можна почистити спиртом і серветкою. Бластомери будуть лізувати, якщо їх розділити відразу після поділу; 5–10 хв після розщеплення - найкращий час для успішних маніпуляцій, якщо вам не потрібні більш ранні поділи. Розділення AB/P1 є найпростішим. Чотириклітинні ембріони також можна розділити. В якості альтернативи, щоб отримати бластомери P2 та EMS, P1 можна розділити після першого поділу та EMS/P2 після другого. Бластомери P-лінії можна розпізнати за відносними розмірами та їх лінійним розташуванням. За низького врожаю MS, E, P3 і C можна відокремити від чотирьох нащадків початкового ізольованого бластомера P1. Ідентифікація клітин, зроблена на основі розміру клітини, може бути підтверджена вивченням окремих періодів клітинного циклу.