Механізми ниркового контролю гомеостазу калію при повній недостатності альдостерону

Фізіологічні параметри мишей AS +/+ та AS -/-. Відповідь мишей AS +/+ (відкриті бруски) та AS -/- мишей (заповнені бруски) на 48-годинне годування контролем (0,8% K +), 2% K +, 3% K + та 5% K + дієти . Мишей утримують у метаболічних клітках для реєстрації споживання їжі (A), маси тіла (B), споживання води (C), об’єму сечі (D), плазми [K +] (E), плазми [Na +] (F), екскреція K + з сечею (G), екскреція Na + з сечею (H), співвідношення сечі за 24 години [K +]/[креатинін] (I) та сечі [Na +]/[креатинін] (J) із сечею. Зміни споживання їжі та маси тіла реєструються протягом усього 48-годинного періоду годування і виражаються як різниця (Δ) у їжі та масі тіла мишей за останні 48 годин до експерименту. Повідомляється про виведення сечової рідини та іонів за останні 24 години. Концентрацію іонів у крові вимірюють в кінці експерименту з годуванням. n = 5–7 мишей на групу. Значення - це середнє значення ± SEM. * P≤0,05; ** Р≤0,01; *** Р≤0,001.

механізми

Експресія та субклітинний розподіл ROMK у нирках мишей AS +/+ та AS -/-, яких утримували на 2% -ній дієті K + протягом 48 годин. (A) Виявлення повністю і незрілих глікозильованих каналів ROMK (смуги 55 кДа та приблизно 42 кДа відповідно) шляхом імуноблотингу з використанням загальних мембранних фракцій цілих гомогенатів нирок. Мембрана повторно досліджується на β-актин. n = 5 мишей на групу. (B) Виявлення каналів ROMK у DCT та CNT шляхом імунофлуоресценції на кріосекціях нирок. Канальці ідентифікуються шляхом визначення вмісту кальбіндину D28K (не показано), як описано в стислих методах. Брусок, приблизно 25 мкм.

Експресія та субклітинна локалізація субодиниць ENaC у нирках мишей AS +/+ та AS -/-, які утримувались на 2% -ній дієті K + протягом 48 годин. (A) Виявлення субодиниць α-ENaC, β-ENaC та γ-ENaC шляхом імуноблотингу із застосуванням загальних мембранних фракцій цілих гомогенатів нирок. Усі мембрани піддаються зондуванню на β-актин і дані нормалізуються щодо β-актину. Стовпчасті графіки представляють денситометричні дані. n = 5 мишей на групу. Значення - це середнє значення ± SEM. * P≤0,05. (B) Виявлення субодиниць α-ENaC, β-ENaC та γ-ENaC в УНТ та кортикальних CD за допомогою імунофлюоресценції на кріосекціях нирок. Канальці ідентифікуються шляхом визначення вмісту кальбіндину D28K (не показано), як описано в стислих методах. Брусок, приблизно 25 мкм.

Вплив інгібування AT1R лозартаном на прийом їжі, вміст K + із плазмою, виведення K + із сечею, кліренс креатиніну та субклітинний розподіл β-ENaC та ROMK у мишей AS +/+ та AS -/-, які утримуються на дієті 2% K + протягом 48 годин. (A) Споживання їжі, співвідношення сечі [K +]/[креатинін], концентрація K + у крові, кліренс креатиніну у мишей через 13 годин після обробки носієм (Veh) або лозартаном (Los). Апарат і лозартан вводять підшкірно через 36 годин після початку експерименту з годуванням. Прийом їжі та виведення іонів із сечею реєструються протягом наступних 13 годин. n = 5 у групі лозартану; n = 4 у групі транспортних засобів. Значення - це середнє значення ± SEM. * P≤0,05; ** Р≤0,01. (B) Виявлення β-ENaC та ROMK у пізніх DCT та CNT мишей, дефіцитних AS та дефіцитних носієм та лозартаном, шляхом імунофлуоресценції на кріосекціях нирок. Канальці ідентифікуються шляхом визначення вмісту кальбіндину D28K (не показано), як описано в стислих методах. Брусок, приблизно 25 мкм.

Транскрипція, експресія, фосфорилювання та активність чутливого до тіазидів NCC у нирках мишей AS +/+ та AS -/-, які утримувались на 2% -ній дієті K + протягом 48 годин. (A) Рівні мРНК NCC оцінюються за допомогою RT-PCR у реальному часі. n = 7 мишей на групу. (B) Виявлення загального NCC та NCC, фосфорильованого в треоніні 53 (pT53 NCC), треоніні 58 (pT58 NCC) та серині 89 (pS89 NCC), шляхом імуноблотінгу з використанням загальних мембранних фракцій цілих гомогенатів нирок. Дані нормалізуються щодо β-актину. Гістограми представляють денситометричні дані. n = 5 мишей на групу. (C) Різниця (Δ) у співвідношенні сечі [Na +]/[креатинін] та [K +]/[креатинін] між мишами, що вводять носій (DMSO), та мишами, що вводять гідрохлоротіазид (HCTZ). Апарат і HCTZ вводять внутрішньочеревно через 48 годин після початку експерименту з годуванням. Сеча збирається протягом наступних 4 годин. n = 8–9 для кожної групи. Значення - це середнє значення ± SEM. * P≤0,05; ** Р≤0,01.

Активність каналу Na + та K + у дистальній частині товстої кишки. (A) Камерні експерименти типу Уссінга використовуються для реєстрації струмів чутливих до барію (Ba +) каналів K + в слизових оболонках товстої кишки, виділених від мишей AS +/+ та AS -/- після годування або контролем, або 2% K + дієта на 48 годин. (B) Чутлива до барію різниця іонних струмів обчислюється і наноситься у вигляді стовпчастих графіків. (C) Запис амілоридних (амільних) чутливих струмів Na + каналу на дистальних слизових оболонках товстої кишки від мишей AS +/+ та AS -/-, яких утримували або на контрольній дієті, або на 2% -ній дієті K + протягом 48 годин. (D) Чутливі до амілориду різниці іонних струмів обчислюються та наносяться у вигляді стовпчастого діаграми. n = 5–6 мишей на дієту та генотип. Промінні концентрації становлять 5 мМ для BaCl2 та 100 мкМ для амілориду. Значення - це середнє значення ± SEM. * P≤0,05.