Дієти, багаті холестерином або жирами, прискорюють природний спад віку щодо нейрогенезу гіпокампа дорослих та

Усі процедури, що стосуються суб'єктів тварин, проводились згідно з інституційними правилами CINVESTAV-IPN, що керуються доглядом та використанням лабораторних тварин. Схвалення протоколу було отримано від Інституційного комітету з догляду та використання тварин (номер протоколу 0081-14). Для проведення дослідження на початку експерименту було використано 25 самок 5-місячних щурів Вістар. Щурів отримували з Інституційного фонду тварин (IAF) та розподіляли у 3 групи. Тварин утримували в умовах контрольованого освітлення, повітря та вологості та отримували їжу та воду за бажанням. Щурів випадковим чином розподіляли до експериментальних груп наступним чином: контрольна дієта (n = 8), дієта з жирними кислотами (n = 8), збагачена холестерином дієта (n = 9). Тварин годували до 10 тижнів різними дієтами, компоненти яких описані в таблиці 1. Масу тіла реєстрували щотижня. Всі інституційні та міжнародні норми були дотримані, щоб уникнути страждань тварин та зменшити кількість тварин, зайнятих у дослідженні.

2.2. Зразки крові та профіль ліпідів

На 0 тижні всіх тварин відвезли до приміщення для експериментів і знеболили 5% ізофлураном для індукції та 3% для утримання в наркозній камері (Vetequip Impac6). Як тільки тварини відчували себе під впливом анестезії, низькі лапи голили, а кров збирали канюлею із стегнової вени. Зразки крові зберігали в пробірці Еппендорфа з гепарином і зберігали при кімнатній температурі. Після цієї процедури тварин повертали в домашні клітини, зразки крові центрифугували та збирали плазму для подальшого аналізу. Досліджуваними параметрами були: загальний холестерин, тригліцериди, ліпіди високої щільності (ЛПВЩ) та ліпіди низької щільності (ЛПНЩ). Зразки були направлені в клінічну ветеринарну лабораторію для їх аналізу. Тварини мали 24 години голодування перед забором зразків крові, щоб уникнути негайних наслідків дієти.

Таблиця 1. Харчовий склад гранул.

2.3. Ін’єкції BrdU

До 6-го тижня лікування тварини отримували разову дозу 5-бром-2'дезоксиуридину (BrdU) (50 мг/кг ваги тіла, B5002_SIGMA) з метою мічення проліферуючих клітин в зубовидному звивистому відділі гіпокампа.

2.4. Підвищений плюс лабіринт

Для того, щоб проаналізувати можливу емоційну модуляцію, спричинену дієтою, щурів тестували за допомогою тесту на підвищений плюс лабіринт (EPM) до 3-го тижня після ін'єкції BrdU. Це широко використовуваний тест на тривожність, який досліджує поведінку філогенетично обумовлену. Він використовує природну огиду щурів до відкритих/високих просторів і перевіряє, як тварини можуть впоратися зі стресовим рівнем [20]. Тест проводили, як повідомляли Leal-Galicia et al., [15]. Апарат являє собою підняту поверхню з хрестоподібною формою, де два плечі закриті стінами, а два відкриті. Тварина поміщається в центр хреста обличчям до закритої руки і залишається там для вільного дослідження протягом 300 сек. Тварини з низькою тривожністю проводять більше часу на розпростертих обіймах. Вимірювали кількість переходів між відкритими та закритими руками, а також час, витрачений на вивчення розкритих рук.

2.5. Пам'ять розпізнавання нових об'єктів

2.6. Підготовка тканин

2.7. Аналіз долі клітини

Для кількісної оцінки кількості BrdU та DCX-позитивних клітин у субгранулярній зоні та в зернистому шарі клітин зубчастої звивини проводили підрахунок флуоресцентних клітин протягом усього ростро-каудального простору гіпокампу із застосуванням звичайного конфокального мікроскопа. Метод оптичного дисектора застосовувався згідно з описаним раніше в Kempermann et al., [23]. Коротко, одну з кожних 6 секцій було зібрано для обробки вільно плаваючою імуногістохімією проти BrdU та DCX. Після проведення імунозабарвлення (як було описано раніше) зрізи монтували у покривні склянки, і кожну клітину, забарвлену на BrdU або DCX, вичерпно підраховували у кожній зрізах. Загальну кількість BrdU-позитивних клітин на тварину отримували, помноживши на 50 кількість позитивно підрахованих клітин.

2.8. Статистичний аналіз

Статистичний аналіз проводили за допомогою GraphPad Prism 6. Через поведінкові дані не має нормального розподілу, дані аналізували за допомогою тесту Крускала-Уолліса з подальшим порівняльним багаторазовим тестом Данна, дані, що стосуються фізіологічних вимірювань, аналізували за допомогою дисперсійного аналізу факторів (ANOVA) за яким слідує спеціальний тест Бонферроні, де це доречно. Статистична значимість виділяється символом, коли p ≤ 0,05; 2 символи при p ≤ 0,01; 3 символи при p ≤ 0,001; 4 символи при p ≤ 0,0001. * стосується порівняно з контролем, і відноситься до групи FAD. Всі значення наведені як середні значення ± SEM, з n = 8 - 9 тварин у кожному стані. Для взаємозв'язку між масою тіла та індексом розвідки набута вага на тварину порівняно з її показником в індексі розвідки була графічною.

3.1. FAD викликає збільшення ваги тіла

FAD індукує збільшення маси тіла у самок щурів, починаючи з 4-го тижня лікування, порівняно з контрольними тваринами та тваринами з CED, і такі відмінності зберігаються до кінця лікування (F (10, 88) = 4,217, p ≤ 0,0001) (˚ В). Крім того, індукує збільшення маси епідермального жиру порівняно з контролем та лікуванням CED (F (2, 22) = 3,576, p = 0,0452) (Рисунок 1 (b)).

3.2. FAD та CED викликають зміни в переробці ліпідів

Тварини, яких годували CED, демонструють постійне значне збільшення рівнів загального холестерину в плазмі, яке було дуже високим на кінець лікування (F (2, 20) = 35,76, p ≤ 0,0001, значення групи вважається #) (Рисунок 2 (а) вважається #). Цей тип дієти також індукує значне підвищення рівня ЛПНЩ та тригліцеридів (F (2, 23) = 11,31, p = 0,0004, значення групи вважається #) та (F (2, 20) = 35,76, p ≤ 0,0001) (рис. Значення групи 2 (d) та Рисунок 2 (b) визнано відповідно #). Група, яка отримувала FAD, демонструє дуже значне підвищення рівня загального холестерину в плазмі крові до третього тижня лікування. Однак наприкінці експерименту рівні холестерину були подібні до тих, що спостерігались у контрольній групі (F (2, 20) = 35,76, p ≤ 0,0001, значення групи вважали &). Крім того, ця дієта також індукує збільшення рівня ЛПНЩ до третього тижня (F (2, 21) = 4,1777, р = 0,0297, значення групи позначається як &), але не викликає суттєвих змін рівня тригліцеридів у крові. У контрольній групі спостерігалося постійне збільшення загального рівня холестерину та ЛПНЩ, але це нижче, ніж у групі CED (F (2, 21) = 9,730, р ≤ 0,0010, значення групи вважається *).

3.3. Дієта холестерину викликає подібні до тривоги поведінки, а FAD та CED - короткочасний дефіцит пам'яті

EPM - широко застосовуваний тест для оцінки здатності гризунів справлятися з меншим стресовим фактором та використовувати природну дослідницьку поведінку щурів.,