Усічені варіанти Serratia proteamaculans Oligopeptidase B, що мають різні дії

Приналежність

  • 1 Інститут біоорганічної хімії імені Шемякіна та Овчіннікова РАН, Москва, 117997, Росія. [email protected].

Автори

Приналежність

  • 1 Інститут біоорганічної хімії імені Шемякіна та Овчіннікова РАН, Москва, 117997, Росія. [email protected].

Анотація

Лікування самородної психрофільної олігопептидази В із протеакулянів Serratia (PSP, 78 кДа) хімотрипсином (розчинним або іммобілізованим на модифікованому пористому склі MPG-PA) у присутності 50% гліцерину призводить до отримання усіченої ферментної форми (PSP-Chtr,

усічені

66 кДа), який зберігає активність щодо низькомолекулярного субстрату PSP, BAPNA, але на відміну від PSP, активний щодо білкового субстрату азокасеїну. За допомогою мас-спектрометрії MALDI-TOF було показано, що в PSP-Chtr відсутня N-кінцева область молекули, яка огортає каталітичний домен PSP і нібито запобігає гідролізу високомолекулярних субстратів. Також було встановлено, що бракуючий фрагмент відповідає N-кінцевому елементу вищого рангу інформаційної структури PSP. Цей висновок підтверджує корисність методу інформаційного аналізу структури для білкової інженерії ферментів. Подібне лікування PSP іммобілізованим трипсином також призвело до отримання стабільної усіченої ферментної форми (PSP-Tr,

75 кДа), якому бракувало 22 С-кінцевих амінокислотних залишків і повністю втрачало ферментативну активність, імовірно через зміни в найближчому оточенні His652 каталітичної тріади.