Імуноферментний аналіз

Імуноферментний аналіз (ІФА) є більш специфічним і дозволяє виключити хибнопозитивні титри в результаті перехресної реактивності з M. genitalium.

Пов’язані терміни:

  • Антиген
  • Антитіла
  • Фермент
  • Пептид
  • Білок
  • Імуноаналіз
  • Імуноглобулін М
  • Ланцюгова реакція полімерази

Завантажити у форматі PDF

Про цю сторінку

Токсокароз

Серологічні тести

ІФА, використовуючи екскреторно-секреторні антигени з личинок інфекційної стадії, є обраним діагностичним тестом. У пацієнтів, клінічні ознаки та анамнез яких свідчать про вісцеральний токсокароз, позитивний ІФА Toxocara є вагомим передбачуваним доказом інфекції Toxocara. Підвищення або падіння титру з подвійною різницею у нещодавно хворого пацієнта відповідає вісцеральному токсокарозу. Оскільки титри антитіл до токсокари можуть залишатися підвищеними протягом багатьох років після первинної інфекції, вимірюваний титр не є доказом причинного зв’язку між Т. canis або T. cati та поточною хворобою. Опитування показали, що у 1–10% безсимптомних дітей титри ІФА становлять 1: 32 або більше. У пацієнтів з ураженнями очей, сумісними з токсокарозом, позитивні титри ІФА підтверджують діагноз, але не виключають інших патологій очей. Тестування на токсокаральний ІФА доступне в Центрах контролю та профілактики захворювань (CDC) та ряді інших клінічних лабораторій США.

Аналіз мікотоксину охратоксину А в каві

112.6.1 ІФА

ІФА став популярним та корисним скринінговим інструментом завдяки наявності поліклональних та моноклональних антитіл проти кількох мікотоксинів, включаючи ОТА. Більшість комерційних ІФА для мікотоксинів покладаються на конкурентний гетерогенний формат ІФА, де токсин із зразка конкурує з міченим токсином (таким як кон'югат токсин-фермент) за обмежену кількість сайтів, що зв'язують антитіла. 23

Методи ІФА мають переваги завдяки своїй простоті та підвищеній кількості зразків, які можна аналізувати одночасно, але лише для одного мікотоксину. 11 Однак ІФА менш точний і чутливий, ніж звичайні хроматографічні аналізи. 18 Крім того, спостерігаються хибнопозитивні чи негативні результати через перехресні реакції між молекулами або перешкоди. Тому набори ІФА не слід використовувати як кількісний метод 34, а слід використовувати лише з харчовими продуктами, для яких вони були широко протестовані та продемонстрували, що вони працюють без перешкод.

Тим не менш, ІФА є доступним підходом для внутрішнього промислового контролю у багатьох харчових галузях, і, у конкретному випадку виробників кави, його можна використовувати для контролю забруднення зеленої кави.

Імуноаналізи, пов’язані з ферментами

Сандіп К. Вашист, Джон Х.Т. Луонг, у Довіднику з технологій імунологічного аналізу, 2018

Анотація

Імуноаналіз, зв’язаний з ферментами (EIA), є найбільш широко використовуваним імунодіагностичним форматом в охороні здоров’я, промисловості та біоаналітичному середовищі. Останні кілька десятиліть стали свідками розробки ручних та автоматизованих форматів ОВНС. Спочатку посібник EIA був переважним форматом, коли область клінічної діагностики була менш просунутою. Тим не менше, імуноферментний аналіз, найбільш часто використовуваний формат EIA, все ще застосовується в обмежених ресурсах. Зараз тенденція змістилася до автоматизованих ОВНС, які можна проводити в центральних лабораторіях за допомогою клінічних аналізаторів. Дійсно, широкий спектр аналізаторів став доступним для індивідуальних потреб та вимог різних установ охорони здоров’я. Нещодавня тенденція також сильно схильна до тестування з точки зору догляду за допомогою вдосконалених форматів лабораторії на чіпі (LOC), швидких стратегій ОВНС та портативних недорогих пристроїв зчитування, зокрема зчитувачів смартфонів. Досягнення додаткових технологій, таких як мобільне медичне обслуговування, LOC, мультиплексне виявлення, технології мікровиробництва та клінічний бал, надалі прокладають шлях до недорогих та аналітично вищих ОВНС.

Імуноферментний аналіз

Анотація

Імуноферментний аналіз (ІФА) перетворився на інші типи імуноаналізів на початку 1970-х років і зараз є одним із найбільш широко використовуваних лабораторних методів у клінічній, поступальній та фундаментальній науках, а також у клінічній медицині. У цій главі обговорюються основні поняття ІФА та його найбільш часто використовувані форми, такі як сендвіч, непрямий та конкурентний аналізи, а також їх застосування та міркування, пов'язані з розробкою нового аналізу ІФА. Основна увага в цій главі зосереджена на використанні ІФА у клінічних та поступальних дослідженнях, спрямованих на надання читачеві необхідних інструментів для застосування ІФА у їхньому власному дослідницькому контексті. Наведено приклад того, як ELISA може бути використаний у трансляційному сценарії дослідження, а також детальний протокол, що описує, як це зробити, у цьому прикладі.

Вірусна інфекція грипу в дихальній системі - потенційні способи моніторингу

3.8 Імуноферментний аналіз

sciencedirect

Малюнок 2.7. Імуноферментний аналіз (ІФА)

В основному існує три типи ІФА (прямий, непрямий та сендвіч). Тут сендвіч ІФА показаний як приклад.

Техніка та програми видобутку: біологічна/медична та екологічна/криміналістика

3.07.3.3 Імуноферментний аналіз

Імуноферментний аналіз (ІФА) є одним із найбільш широко використовуваних видів імунологічного аналізу і є більш безпечним та простим, ніж RIA. ІФА передбачає використання ферментної активності як засобу виявлення зв'язування кон'югату антитіло-фермент. 13 Ферменти специфічні як в реакції, яку вони каталізують, так і в субстраті, який вони впізнають, і підлягають регуляції своєї активності іншими молекулами. Отже, використання ферментів може бути вигідним завдяки ферментній специфічності та явищам ампліфікації, обумовленим ферментативним каталізом. ІФА відрізняється типом виявлення, який, як правило, є спектрофотометричним, коли ферментна мітка виробляє кольоровий продукт, або електрохімічним, коли фермент каталізує окисно-відновну хімічну реакцію. Основним недоліком ІФА є залежність активності ферменту від фізичного та хімічного середовища.

МІКРОБІОЛОГІЧНІ ТЕХНІКИ

Імуноферментний аналіз (ІФА)

ІФА виявляють та посилюють реакції антиген-антитіло за допомогою молекул ковалентно зв'язаного ферменту-антитіла. Наявність ферменту (що вказує на наявність антигену) виявляється шляхом додавання відповідного субстрату. Системи детектування, як правило, призначені для зміни кольору, який може бути визначений кількісно за допомогою зчитувача мікропланшетів.

ІФА можна використовувати у двох режимах, якісно для визначення присутності або відсутності або кількісно для визначення кількості присутнього антигену. Набори ІФА часто залежать від адсорбції антитіла або антигену до твердої фази, наприклад, лунок мікротитрувальної пластинки, поверхні пластикових гранул або пластикової палички. Вибір використовуваних антитіл (або антитіл) визначає специфічність аналізу ELISA, який може варіюватися від специфічного до роду до штамового. Принцип, на якому базуються методи ІФА, зазвичай перешкоджає їх використанню для визначення загальної кількості мікробів. Однак їх можна використовувати для виявлення таких збудників, як Salmonella spp., Listeria spp.

Шлунково-кишкова токсикологія

10.09.2.5 Імуноферментний аналіз

Імуноферментний аналіз (ІФА) - це техніка, яка використовується для виявлення присутності антитіла або антигену в різних зразках. Існує кілька різних типів ІФА, включаючи непрямі, сендвіч, конкурентні та зворотні ІФА. Все це можна використовувати для виявлення білків, вірусів та наркотиків. Найбільш поширеним ІФА, що використовується для токсикантів, є непрямий ІФА. Цей аналіз може бути використаний для аналізу конкретного аналіту або скринінгу груп сполук, які перехресно реагують з антигеном, покритим на твердій опорній поверхні (наприклад, мікротитрувальна пластина). Спочатку процедура включає додавання зразка, що цікавить, до антигену, покритого мікропланшетною пластинкою. Потім до антигену додається антитіло, яке пов'язане з ферментом. В результаті реакції антитіла з антигеном утворюється флуоресцентний комплекс антиген/антитіло, який можна виявити під ультрафіолетовим світлом. Оптична щільність кожної лунки в мікротитраційній пластині порівнюється з контрольними зразками. Зразки, позитивні на білок або токсикант, відображають їх здатність конкурентно зв'язувати антиген. Незважаючи на те, що зменшення фону та посилення сигналу є потенційними обмеженнями для аналізу ІФА, ці аналізи демонструють високий ступінь специфічності та чутливості.

Методи аналізу шлунково-кишкових токсикантів ☆

Імуноферментний аналіз

Імуноферментний аналіз (ІФА) - це техніка, яка використовується для виявлення присутності антитіла або антигену у зразках. Існує кілька різних типів ІФА, включаючи непрямі, сендвіч, конкурентні та зворотні ІФА. Усі вони можуть бути використані для виявлення білків, вірусів та наркотиків. Найпоширенішим ІФА, що використовується для виявлення токсичних речовин, що впливають на шлунково-кишковий тракт, є непрямий ІФА. Цей аналіз може бути використаний для аналізу конкретного аналіту або скринінгу груп сполук, які перехресно реагують з антигеном, покритим на твердій опорній поверхні (наприклад, мікротитрувальна пластина). Спочатку процедура включає додавання зразка, що цікавить, до антигену, покритого мікропланшетною пластинкою. Потім до антигену додається антитіло, яке пов'язане з ферментом. Реакція антитіла на антиген утворює флуоресцентний комплекс антиген/антитіло, який виявляється ультрафіолетом. Оптична щільність кожної лунки в мікротитраційній пластині порівнюється з контрольними зразками. Зразки, позитивні на білок або токсикант, відображають їх здатність конкурентно зв'язувати антиген. Незважаючи на те, що зменшення фону, посилення сигналу або перехресна реактивність є потенційними обмеженнями для аналізу ІФА, ці аналізи демонструють високий ступінь специфічності та чутливості.

Том 1

Маргарет А.Т. Фріберг,. Хані А.Авад, в Енциклопедія біомедичної інженерії, 2019

Імуноферментні аналізи (ІФА)