Гіполіпідемічна та подібна до ожиріння активність стандартизованого екстракту Hypericum perforatum Л. у Щурів

1 Науково-дослідна лабораторія фармакології, Факультет фармацевтики, Технологічний інститут, Індуїстський університет Банараса, Варанасі 221 005, Індія

2 Фармакологічні дослідницькі лабораторії, д-р Willmar Schwabe GmbH & Co. KG, Карлсруе, Німеччина

3 Stettiner Straße 1, 76138 Карлсруе, Німеччина

Анотація

Hypericum perforatum відомо, що впродовж століть застосовується в різних лікарських цілях. Антидепресантна активність Hypericum perforatum є загальновизнаним і доведеним як у тваринах, так і в клінічних дослідженнях. Дане дослідження було проведено для вивчення ефекту Hypericum perforatum в батареї тваринних моделей для порушення обміну речовин. Гіперікум тестується на гіполіпідемічну активність у нормальних щурів, активність ожиріння у щурів із ожирінням, що страждають ожирінням, та щурів, що харчуються фруктозою. Гіперікум перорально вводили у вигляді суспензії в 0,3% карбоксиметилцелюлози в дозах 100 і 200 мг/кг маси тіла протягом 15 днів поспіль. Гіперікум значно знизили загальний рівень холестерину та холестерину низької щільності у звичайних щурів. Гіперікум суттєво пригнічував набір ваги у щурів з високим вмістом жиру. У щурів, що харчуються фруктозою, Гіперікум нормалізувала дисліпідемію, спричинену годуванням фруктозою, та покращила чутливість до інсуліну. Взяті разом, Гіперікум може бути обраною антидепресантною терапією для пацієнтів, які страждають на супутній діабет та ожирінням.

1. Вступ

2. Матеріали та методи

2.1. Тварини

Дорослі щури Чарльза Фостера (150 ± 10 г) були отримані з Центрального будинку тварин Інституту медичних наук Індуїстського університету Банарас, Варанасі, Індія. Тварин утримували у групах по шість у поліпропіленових клітках при температурі навколишнього середовища 25 ± 1 ° C та відносній вологості 45–55% із циклом світло/темрява 12: 12 год. Тварин забезпечували харчовими гранулами та водою ad libitum, крім випадків, коли зазначено інше. Усі тварини були акліматизовані до лабораторних умов протягом щонайменше одного тижня перед тим, як використовувати їх для експериментів. Дотримувались принципів лабораторних рекомендацій щодо догляду за тваринами (публікація NIH № 85–23, переглянута 1985 р.). Отримано попереднє схвалення від Інституційного комітету з питань етики тварин (лист No Dean/2009-10/693).

2.2. Екстракт рослин

Висушений гідроалкогольний (50%) екстракт цілої рослини Hypericum perforatum У цьому дослідженні було використано L. Стандартизований екстракт був придбаний у компанії Indian Herbs Research and Supply Co. Ltd., Сахаранпур, Індія. Екстракт Hypericum perforatum (HpE) стандартизовано за допомогою ВЕРХ, щоб містити не менше 3,00% гіперфорину та 0,3% гіперциніну, отже, екстракт, використаний у цьому дослідженні, був подібним до екстрактів Гіперікум раніше вивчені в нашій лабораторії [2, 4–6].

2.3. Введення рослинного екстракту

HpE суспендували в 0,3% карбоксиметилцелюлози (CMC) і вводили перорально через орогастральний зонд у дозах 100 і 200 мг/кг маси тіла на день протягом 15 днів поспіль. Дози підбираються на основі попередніх досліджень нашої лабораторії на тому самому екстракті [2, 4–6, 11].

2.4. Гіполіпідемічна активність у звичайних щурів

2.5. Індукована фруктозою гіпертригліцеридемія та резистентність до інсуліну

Щурів утримували на нормальній гранульованій дієті (NPD) та 20% фруктози у питній воді протягом 15 днів [16–18]. Протягом досліджуваного періоду контрольним щурам давали NPD та нормальну питну воду. Щурів випадковим чином розподіляли на різні групи наступним чином: I група: NPD + нормальна питна вода + 0,3% CMC (16-30-й день), II група: NPD + 20% фруктозна вода + 0,3% CMC (16-30 день), Група III: NPD + нормальна питна вода + 0,3% HpE 100 мг/кг (16-30 день), Група IV: NPD + нормальна питна вода + HpE 200 мг/кг (16-30 день), Група V: NPD + 20% фруктозна вода + HpE 100 мг/кг (16-30 день), Група VI: NPD + 20% фруктоза вода + HpE 200 мг/кг (16-30 день).

Введення рослинного екстракту розпочали з 16-го дня і продовжили до 30-го дня експерименту. Щурам групи I (нормальний контроль) та групи II (контроль фруктози) давали однаковий об'єм носія (0,3% суспензії CMC) протягом однакової тривалості. Масу тіла щурів реєстрували на 1-й день, а потім раз на тиждень, так само споживання їжі та води також реєстрували щотижня [18]. Зразки крові відбирали з ретроорбітального венозного сплетення на 30-й день після відповідного голодування, а також оцінювали ТК, ЛПВЩ, ЛПНЩ, ТГ і глюкозу в плазмі за допомогою біохімічних наборів. Глюкозу оцінювали методом глюкозооксидази/пероксидази, як і в наших попередніх дослідженнях [11, 12]. Коротко кажучи, глюкоза перетворюється на глюконову кислоту та H2O2 у присутності глюкозооксидази. Згодом у каталізованій пероксидазою реакції виділений кисень був прийнятий системою хромогену для отримання сполуки хінін-іміну червоного кольору. Поглинання червоного кольору вимірювали при 505 нм і було прямо пропорційно концентрації глюкози. Рівень інсуліну в плазмі крові оцінювали за допомогою імуноферментного аналізу (набір ELISA; DRG Diagnostics, GmbH, Німеччина).

2.6. Ожиріння з високим вмістом жиру та дієтою

Щурів витримували на NPD протягом тижня до початку експерименту. Через тиждень щурів випадковим чином розподіляли у нормальні та ожиріні групи і годували NPD та HFD відповідно протягом 15 днів. Дієта з високим вмістом жиру була складена, як описано Шрінівасаном та ін. [23]. Через 15 днів годували HFD щури, що демонстрували значний приріст ваги порівняно з щурами NPD, знову були розділені на три групи (по шість щурів у кожній групі): контрольна група HFD, яка харчувалася лише HFD, HFD + HpE (100 мг/кг ) і HFD + HpE (200 мг/кг). Лікування HpE розпочинали з 16-го дня до 30-го дня. Щурів контрольної групи забезпечували NPD протягом усіх 30 днів дослідження. Контрольній групі та контрольній групі з HFD давали однаковий об'єм 0,3% суспензії CMC з 16 по 30 день.

Вагу тіла реєстрували в перший день, а потім щотижня. Середнє споживання їжі було зафіксовано на 1, 15 і 30 день. Зразки крові натщесерце збирали на 30-й день із ретроорбітального венозного сплетення під легкою ефірною анестезією. Оцінювали рівень глюкози в плазмі, інсуліну, ТК, ЛПНЩ, ЛПВЩ та ТГ. На 30-й день після забору зразків крові тварин забивали, а мезентеріальні, периренальні та епідидимальні жирові прокладки ізолювали та зважували [24].

2.7. Статистичний аналіз

Дані виражали як середнє значення ± стандартна похибка середнього значення (SEM) для кожної групи

. Статистичний аналіз проводили за допомогою одностороннього дисперсійного аналізу (ANOVA) з подальшим тестом Стьюдента-Ньюмена-Кілса. Для статистичного аналізу було використано програмне забезпечення GraphPad InStat (версія 3.06).

3. Результати

3.1. Гіполіпідемічна активність у щурів

15 днів перорального прийому з HpE призвели до значного зниження загального холестерину в плазмі крові (

𝐹 (3, 2 0) = 1 9. 6 9; 𝑃. 0 0 1

) та рівень LDL-C порівняно з контрольною групою, яка отримувала лікування транспортним засобом. Лікування клофібратом знижувало загальний рівень холестерину, ЛПНЩ (

𝐹 (3, 2 0) = 1 8. 5 6

) та тригліцеридів з одночасним підвищенням рівня ЛПВЩ порівняно з контрольною групою (

𝐹 (3, 2 0) = 1 0. 3 7

). Результати зведені в таблицю 1. Протягом усього дослідження не було статистично значущої різниці у масі тіла різних груп лікування (дані не наведені).