Дефіцит Af17 збільшує виведення натрію та знижує артеріальний тиск

Цифри та дані статті

Цифри

Миші Af17 -/-, які харчувались нормальним харчуванням Na +, мали порушення функції нирок та зниження АТ, незважаючи на незначно підвищений альдо в плазмі. Мишей Af17 +/+ (n = 34) та Af17 -/- (n = 37), які харчувались нормальним харчуванням Na + у метаболічних клітинах, аналізували на параметри, як зазначено. Для вимірювання АТ n = 57 мишей для Af17 +/+ та n = 65 мишей для Af17 -/-. Для всіх інших параметрів n = 6 - 37 мишей/група. Додаткові параметри див. На додатковому малюнку S1. У всіх випадках * P + /+ .

Погіршення та відновлення активності ENaC у мишей Af17 -/-. (A) Репрезентативні сліди струму від прикріплених до клітини пластирів, що контролюють активність ENaC за умов, як зазначено. Пунктирними лініями позначено відповідний поточний стан, а c позначає замкнутий стан. (B – D) Короткий графік ENaC Po (B), активних каналів у патчі (C) та ефективної активності ENaC (D). У всіх випадках * P + /+ .

Af17 регулює експресію мРНК та білка ENaC. (A) RT-qPCR у реальному часі для експресії генів ENaC у нирках мишей, які харчуються звичайною Na + дієтою, з β-актином як внутрішнім контролем. n = 3 миші/група. (B) Вестерн-блот для експресії білків, як зазначено, з β-актином як внутрішнім контролем. Для αENaC при аналізі даних була виключена смуга приблизно 30 кД. me2K79 та me2K9: гістон H3 диметильований K79 та K9 відповідно. n = 4 миші/група. У всіх випадках * P + /+ .

Af17 експресується в альдочутливому дистальному нефроні. (A та B) Зрізи нирок Af17 -/- фарбували X-gal та антитілом проти головного клітинного маркера Aqp2. Області в коробках в А та В посилювались у С та D відповідно. Кінці стрілок вказують на клітини, які очевидно експресують Aqp2 та β-георепортер, керовані промотором Af17.

Делеція Af17 викликає гіперметилювання H3 K79 на промоторі αENaC в нирках. (А) Діаграма промотору αENaC. 12–14 (B і C) ChIP-аналіз, що показує підвищений H3me2K79, асоційований з R0-R3, але не з субрегіоном Ra промотору αENaC. Нирковий хроматин готували з чотирьох WT та чотирьох мутантних мишей, об'єднували у дві групи відповідно до генотипу та аналізували за допомогою ChIP із зазначеними антитілами та з подальшим qPCR у реальному часі з праймерами, що ампліфікували субрегіони промотору αENaC, як показано у A. Relative Рівень H3me2K79 був встановлений на 1 в R0 з нирок WT і розрахований відповідно для всіх інших зразків. * P +/+. n = 4 миші/група (B). Репрезентативні аналізи агарозного гелю кінцевих продуктів qPCR були показані для перевірки специфічності qPCR для кожного зразка (C).

Перфузія Альдо значною мірою компенсувала втрату функції Af17 у нирковій фізіології. Двадцять чотиригодинний об’єм сечі, екскреція електролітів із сечею та АТ досліджувались до (день 0) та після перфузії альдо, як зазначено. n = 10-11 мишей/генотип. Темна смужка: Af17 +/+. Сіра смужка: Af17 -/-. Додаткові параметри див. У Додатковому малюнку S2. У всіх випадках * P + /+ .

Миші Af17 -/- та Af17 +/+ демонструють подібну ниркову фізіологію та АТ у залежності від часу на дієті з низьким вмістом Na +. Af17 +/+ (суцільна лінія або темна смужка) та Af17 -/- (пунктирна лінія або сіра смужка) мишей годували дієтою з низьким вмістом Na + (0,02% Na +) у метаболічних клітинах та аналізували на параметри раніше (день 0) і після лікування у різні моменти часу, як зазначено. Для вимірювання АТ n = 17-21 миші/група. Для всіх інших параметрів n = 4-14 для мишей Af17 +/+ та n = 6-14 для мишей Af17 -/-. Додаткові параметри див. На додатковому малюнку S4. У всіх випадках * P + /+ .

На дієті з високим вмістом К + миші Af17 -/- та Af17 +/+ мали подібну фізіологію нирок та АТ на дієті з високим вмістом К +. Мишей Af17 +/+ і Af17 -/- годували дієтою з високим вмістом K + (6% K +) протягом 5 днів у метаболічних клітинах та аналізували на параметри до (день 0) та після лікування, як зазначено. n = 8-26 для мишей Af17 +/+ та n = 7-25 для мишей Af17 -/-. Додаткові параметри див. У Додатковому малюнку S5. У всіх випадках * P + /+ .

Модель для порушення та відновлення балансу Na + та АТ у мишей Af17 -/-. У таких базальних умовах, як звичайна дієта Na +, видалення Af17 призводить до суттєво підвищеного метилювання H3 K79, а згодом і до порушення активності ENaC, порушення балансу Na + та зниження АТ. Злегка підвищена плазма [альдо] недостатня для протидії ефекту втрати Af17 на метилювання H3 K79 і, отже, не може врятувати фенотип Af17 -/-. Під надлишком альдо, таким як перфузія альдо або дієта з низьким вмістом Na +, різко підвищені рівні альдо ефективно знижують метилювання H3 K79 незалежно від присутності або відсутності Af17, що призводить до порівнянних рівнів метилювання H3 K79 та ниркової фізіології та фенотипу АТ, що не відрізняється від Af17 +/+ та Af17 -/- миші. Для наочності детальні механізми, за допомогою яких Af17 23 та aldo 22 інгібують метилювання H3 K79, не показані. Пунктирна лінія позначає невідомі механізми.