Виснаження клітин Купфера печінки перешкоджає розвитку печінкового стеатозу та стійкості до інсуліну, спричиненого дієтою

В.Х. та А.М. внесли однаковий внесок у цю роботу.

Статті Рисунки та таблиці

Цифри

Вплив виснаження KC на тригліцериди печінки, DAG, керамід та холестерин у відповідь на дієту з високим вмістом жиру або сахарози. Самці щурів Wistar, у яких не було КС або контрольних щурів, піддавались дієті з високим вмістом жиру або сахарози протягом 2 тижнів, як описано в розробці та методах дослідження. Згодом тварин вбивали після нічного голодування, виділяли печінку та визначали вміст тригліцеридів (A), DAG (B), холестерину (C) та кераміду (D) у печінці. Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість у кожній групі.

Вплив виснаження КС на розвиток резистентності до інсуліну печінки на дієті з високим вмістом жиру або сахарози. Самці щурів Wistar, виснажених KC або контрольних щурів, піддавались дієті з високим вмістом жиру (A і B) або високим вмістом сахарози (C і D) протягом 2 тижнів. Згодом тварини голодували протягом ночі, а потім їм піддавали 4 мО · кг -1 кг/хв -1 евглікемічно-гіперинсулінемічного затиску у присутності [3-H 3] -глюкози для вимірювання чутливості печінкового інсуліну, як описано в проекті дослідження та методах. Оцінювали вихід глюкози в печінці (A і C) та пригнічення виведення глюкози в печінці (B і D). Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум чотири в кожній групі.

Виснаження KC GdCl3 в печінці та жировій тканині. Самці щурів Wistar виснажували KC шляхом введення GdCl3, як описано в розробці та методах дослідження. Потім було виділено печінку та жирову тканину, а наявність макрофагів визначали за допомогою qRT-PCR оцінки рівнів мРНК CD68/ED1 та F4/80 (A та B) та підрахунку CD68/ED1-позитивних клітин після імуногістохімічного фарбування печінки та зрізи жирової тканини (C – F), як описано в проекті та методах дослідження. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість у кожній групі для qRT-ПЛР та n = 3 для імуногістохімічного аналізу CD68/ED1-позитивних клітин. (Якісне цифрове зображення цього показника доступне в Інтернет-випуску.)

Експресія генів ліпідного обміну в печінці щурів, що харчуються SC-, HF- та HS, з або без введення GdCl3. Самці щурів Wistar виснажували KC шляхом введення GdCl3, як описано в розробці та методах дослідження. Згодом було виділено печінку, вилучено РНК, а експресія ряду генів ліпідного метаболізму визначалася методом qRT-PCR. Вказано статистичне значення. n = мінімум чотири в кожній групі.

Вплив M1-поляризованих KC на окислення та етерифікацію жирних кислот гепатоцитів та накопичення тригліцеридів. Гепатоцити та КС виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як описано у дослідницькій розробці та методах. Згодом ефекти зазначеного впливу на окиснення жирних кислот, етерифікацію жирних кислот та рівні тригліцеридів (A – C) та фосфорилювання ACC та AMPK (D – F) оцінювали, як описано у проекті дослідження та методах. Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість у трьох примірниках для кожного метаболічного вимірювання. n = мінімум чотири для аналізу ACC та AMPK.

Вплив M1-поляризованих KC на реакцію гепатоцитів на інсулін. Гепатоцити та КС виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як описано у проекті досліджень та методах. Після зазначеного впливу гепатоцити інкубували зі 100 нмоль/л інсуліну протягом 10 хв, готували білкові екстракти та фосфорилювали рецептори інсуліну (ІЧ), фосфорилювали IRS-1, активність PI 3-кінази, пов'язану з IRS-1, та фосфорилювання були оцінені, як описано в проекті та методах дослідження. Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум чотири для кожного експериментального стану.

Експресія TNFα в KC у печінці у відповідь на стандартну дієту чау, жиру та сахарози з високим вмістом жиру та секрецію TNFα з ізольованих M1-поляризованих KC. Самців щурів Wistar піддавали дієті з високим вмістом жиру або сахарози протягом 2 тижнів. Згодом було виділено печінку, підготовлені зрізи та проведено імунофлуоресцентне фарбування для KC та TNFα (A), як описано у дослідженні та методах дослідження. На лівій панелі показані CD68/ED1-позитивні комірки (зелений), на центральній панелі - TNFα-позитивні комірки (червоний), а на правій панелі - об'єднані зображення. На всіх панелях фарбування Хохста використовувалося для візуалізації ядер клітин (синього кольору). n = мінімум три. Для експериментів in vitro (B) гепатоцити та KC виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як показано. Після зазначеної експозиції відбирали середовища, а TNFα визначали кількісно за допомогою імуноферментного аналізу (ІФА). Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум три в кожній групі. (Якісне цифрове зображення цього показника доступне в Інтернет-випуску.)

Вплив виснаження TNFα на метаболізм ліпідів гепатоцитів та активність PI 3-кінази, що стимулюється інсуліном. Гепатоцити та КС виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як описано у дослідницькій розробці та методах. Згодом ефекти зазначеного впливу на окислення жирних кислот та тригліцериди у відсутність або присутність TNFα-нейтралізуючого антитіла оцінювали, як описано в розробці досліджень та методах (A). В окремих експериментах гепатоцити інкубували зі 100 нмоль/л інсуліну протягом 10 хв після експозицій, подібних до впливу в (А), потім готували екстракти білків та оцінювали активність PI 3-кінази, пов'язану з IRS-1, як описано в проекті дослідження та методи (B). Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість для кожного експериментального стану, крім тригліцеридів (n = 3).

Столи

Вимірювання маси тіла, епідидимального жиру та плазми крові у щурів, оброблених фізіологічним розчином або GdCl3, підданих дієтам NC, HF або HS протягом 2 тижнів

NC сольовий розчин NC GdCl3HF сольовий розчинHF GdCl3HS сольовий розчинHS GdCl3

Маса тіла (г), день 0	279 ± 3	278 ± 8	289 ± 3	288 ± 7	254 ± 14	270 ± 9
Маса тіла (г), день 21	375 ± 12	351 ± 9	371 ± 3	382 ± 7	352 ± 14	346 ± 9
Споживання їжі (Ккал/добу)	100 ± 2	96 ± 3	110 ± 3	104 ± 3	95 ± 3	89 ± 5
Епідидимальний жир (г)	6,2 ± 0,3	5,4 ± 0,3	6,6 ± 0,2	6,3 ± 0,8	5,2 ± 0,5	5,3 ± 0,5
Глюкоза (мг/дл)
Перед затискачем	88 ± 5	НС	96 ± 7	89 ± 5	92 ± 5	88 ± 7
Після затискача	87 ± 7	НС	101 ± 5	97 ± 3	98 ± 8	93 ± 4
Інсулін (нг/мл)
Перед затискачем	0,5 ± 0,2	0,6 ± 0,1	0,8 ± 0,5	0,8 ± 0,3	0,5 ± 0,2	0,6 ± 0,1
Після затискача	4,5 ± 1	НС	5,5 ± 0,9	4,0 ± 1,2	5,1 ± 0,8	4,5 ± 1,3
TG плазми (мг/дл)	51,2 ± 0,8	46,7 ± 6,2	63,4 ± 5,7 *	76,2 ± 8,6 *	91,6 ± 8,0 *	109,9 ± 9,0 *
Плазмові коефіцієнти жирності (мМ)	0,6 ± 0,1	0,4 ± 0,1	0,7 ± 0,1	0,5 ± 0,1	0,7 ± 0,1	0,5 ± 0,1
TNFα в плазмі (пг/мл)	36,1 ± 3,4	34,2 ± 0,8	42,8 ± 10,4	54,6 ± 17,9	34,0 ± 0,4	39,8 ± 2,2
LPS у плазмі (ЄС/мл)	8,3 ± 0,3	7,4 ± 0,3	8,5 ± 1,1	9,1 ± 1,5	15,0 ± 1,7	16,2 ± 4,0

Дані є середніми ± SE; n = мінімум 5/група, за винятком SC інсуліну після затискання, де n = 3. Значення для TG, FFA, TNFα та LPS - від зразків крові, що голодувались протягом ночі.

* Значно відрізняється від сольового розчину NC. FFA, вільні жирні кислоти; NA, не застосовується.