Тест на ПЛР фекалій для плоду тритріхомонади

Загальна інформація

Плід тритріхомонади є важливою причиною діареї у котів. Цей аналіз посилює ДНК T. fetus у фекаліях і, як було показано, виявляє лише 10 організмів на 1 грам калу. Всі реакції ПЛР проводяться з позитивним та негативним контролем, а на позитивних зразках проводять рестрикційний фермент, щоб переконатися, що ампліфікована послідовність ДНК є специфічною для Т. fetus.

тест

Для цього тесту нам знадобиться до 1 грама свіжого калу. Щоб збільшити ймовірність виявлення інфекції, слід взяти пробу у кішки, коли у неї діарея. Зразки калу можна взяти із спонтанно випорожненого стільця, використовуючи фекальну петлю або застосовуючи техніку промивання сольовим розчином товстої кишки (див. Нижче). У зразку не повинно бути котячого посліду, оскільки деякі компоненти певного котячого посліду можуть гальмувати реакції ПЛР. Зберіть пробу калу якомога швидше. Однак після того, як зразок калових мас був зібраний, його можна зберігати в холодильнику протягом одного тижня перед відправкою. Будь ласка, доставляйте охолоджені зразки на ніч з гелевим пакетом з льодом (зразки не потрібно заморожувати, але ці запобіжні заходи допоможуть запобігти перегріванню зразків під час транспортування). Час обробки цього аналізу становить 1-2 робочих дні після отримання зразка в шлунково-кишковій лабораторії.

Загальні відомості про плід тритріхомонади

При оцінці пацієнтів з діареєю у котів важливо включити інфекційну етіологію до списку диференціальних діагнозів. Одним з таких інфекційних організмів є Tritrichomonas fetus, джгутиковий найпростіший паразит, який зазвичай асоціюється з венеричним трихомоніазом великої рогатої худоби. Нещодавно Т. плід також був визначений кишковим збудником у кішок. Повідомлялося про діарею у котів як після експериментального, так і природного зараження. Хоча справжнє розповсюдження інфекції T. fetus у котів невідоме, підозрюється, що воно є відносно високим. В одному дослідженні 31% із 117 котів, обстежених на міжнародній виставці котів, були заражені Т. fetus.

Хоча можуть заразитися коти будь-якого віку, породи чи статі, молоді коти, які щільно розміщені (наприклад, коти в розплідниках, притулках для тварин чи домогосподарствах з декількома котами), схоже, мають підвищений ризик. Інфекція найчастіше спостерігається у молодих котів (тобто тих, яким менше 12 місяців), але старші коти також можуть заразитися. Т. плід переважно колонізує поверхню слизової оболонки товстої кишки, що призводить до хронічної діареї товстого кишечника. Без відповідного лікування коти зазвичай залишаються постійно інфікованими. Хоча діарея може спонтанно вирішитись, у котів часто виникають періодичні напади діареї після дії стресу. Кішки, інфіковані T. fetus, зазвичай здаються здоровими, але демонструють підвищену частоту дефекації з рідким до рідкого стільця, який може містити кров та/або слиз. Також часто спостерігається нетримання калу. Анальна область часто здається набряклою і може стати болючою при сильній діареї. У деяких випадках може статися випадання прямої кишки.

Хто повинен пройти тестування?

Взагалі, кошенят та молодих котів із середовищ, що мають багато котів, із хронічною діареєю слід обстежувати на наявність інфекції T. fetus. Однак слід зазначити, що хворіють також коти в домогосподарствах з одинокими котами та старші коти, тому коти з клінічними ознаками, які не мають іншої очевидної причини діареї, також повинні пройти тестування. Крім того, коти, які не реагують на лікування підозри на Giardia spp. інфекцію слід перевірити, оскільки двох паразитів іноді плутають під час звичайного дослідження мазка на кал.

Діагностика

Діагностика інфекції плодом Т. може бути встановлена ​​шляхом виявлення тритрихомонад за допомогою прямого дослідження мазка калу, посіву калу, ПЛР-аналізу калового матеріалу або біопсії слизової оболонки товстої кишки. До недоліків прямого дослідження мазка калу належать низька чутливість (14%), низька специфічність (Т. плід може бути неправильно діагностований як Giardia spp. Або непатогенна Pentatrichomonas hominis), а також той факт, що можна використовувати лише свіжі зразки калу.

Плід тритріхомонади також можна культивувати в домашніх умовах за допомогою комерційно доступної системи культури In Pouch ™ TF (Biomed Diagnostics, Сан-Хосе, Каліфорнія). Мішки слід інокулювати менш ніж 0,1 г свіжого калу, а потім інкубувати при 25 ° C. Мішечки потрібно оцінювати під мікроскопом кожні пару днів. Результати зазвичай отримують між 1 та 11 днями після встановлення пакета. Хоча посіви калу є більш чутливими, ніж пряме дослідження мазка калу, важкі недоліки цього методу є труднощі в інтерпретації результатів, необхідність використання свіжої кали та той факт, що результати можуть бути недоступними протягом 11 днів.

ДНК плоду тритріхомонади може бути ампліфікована із зразків калу за допомогою ПЛР. Показано, що ПЛР є найбільш чутливим методом виявлення Т. плід у зразках калу і ідеально підходить для прямої діагностики інфекції Т. плід. Переваги тестування ПЛР порівняно з культурою включають більш високу чутливість, швидший час обробки та простішу обробку та зберігання зразків, оскільки ДНК є відносно стабільною за різних температурних умов. Використання сольової техніки промивання товстої кишки (http://www.youtube.com/watch?v=JMfZ9M80V8E) або фекальної петлі для безпосереднього отримання зразка калу може допомогти збільшити ймовірність виявлення Т. плода. Осад зразка рідини, отриманий із промивання сольовим розчином товстої кишки, слід відокремлювати центрифугуванням або даючи йому відстоятися. Потім цей матеріал подається на ПЛР. В ідеалі, зразки калу слід збирати, коли у кота діарея.

Терапія

Декілька аптечних рецептур з'єднують ронідазол. Деякі приклади - Diamondback Drugs (телефон: 1-866-646-2223; http://www.diamondbackdrugs.com), Аптека для охорони домашніх тварин (телефон: 1-800-742-0516), Аптека Abrams Royal (телефон: 1- 800-458-0804), аптека Westlab (телефон: 1-800-493-7852) та Creative Compounding (телефон: 1-800-672-2177), але інші аптечні склади можуть також мати ронідазол.

Список літератури

  1. Фостер Д.М., Гукін Дж.Л., Поуре М.Ф. та ін. Результат котів з діареєю та інфекцією плоду тритріхомонади. JAVMA 2004; 225: 888-892.
  2. Gookin JL, Stebbins ME та ін. Поширеність та фактори ризику інфікування плодом тритріхомонад котів та лямбліями. J Clin Microbiol 2004; 42: 2707-2710.
  3. Gookin JL, Birkenheuer AJ, et al. Однотрубна гніздова ПЛР для виявлення плоду тритрихомонади в фекаліях котів. J Clin Microbiol 2002; 40: 4126-4130.
  4. Gookin JL, Copple CN, Papich MG, et al. Ефективність ронідазолу для лікування інфекції плоду котячих тритріхомонад. JVIM 2006; 20: 536-543.
  5. LeVine DN, Papich MG, Gookin JL, et al. Фармакокінетика ронідазолу після внутрішньовенного та перорального введення капсули з проміжним вивільненням здоровим котам. JFMS 2011; 12: 244-250.
  6. Гуокін Дж. Л., Штауфер Ш., Дибас Д, Кеннон Д.Х. Документація аеробної стійкості in vivo та in vitro ізолятів плоду котячих тритріхомонад до ронідазолу. JVIM 2010; 24: 1003-1007.
  7. Росадо Т.В., Спехт А, Маркс С.Л. Нейротоксикоз у 4 котів, які отримували ронідазол. JVIM 2007; 21: 328-321.
  8. Rosypal AC, Ripley A, Stockdale Walden HD та ін. Виживання плоду тритріхомонади у воді, котячій сечі, котячому кормі та котячому посліді. Vet Parasit 2012; 185: 279-281.

"Ця послуга виконується відповідно до угоди з Roche Molecular Systems, Inc."