Вплив запатентованого стандартизованого етанолового екстракту листя ортосифону стамінеуса на посилення пам’яті у щурів Доулі Спрей, можливо, через блокаду аденозину А2А Рецептори

Енні Джордж

1 Biotropics Malaysia Berhad, Lot 21 Jalan U1/19, Section U1, Hicom-Glenmarie Industrial Park, 40150 Shah Alam, Selangor, Malaysia

Сасікала Чіннаппан

1 Biotropics Malaysia Berhad, Lot 21 Jalan U1/19, Section U1, Hicom-Glenmarie Industrial Park, 40150 Shah Alam, Selangor, Malaysia

Йогендра Чудхарі

2 Ethix Pharma Laboratories, Karbala Road, Bilaspur 495001, Чхаттісгарх, Індія

Вандана Котак Чудхарі

2 Ethix Pharma Laboratories, Karbala Road, Bilaspur 495001, Чхаттісгарх, Індія

Правен Бомму

2 Ethix Pharma Laboratories, Karbala Road, Bilaspur 495001, Chhattisgarh, India

Хой Джин Вонг

1 Biotropics Malaysia Berhad, Lot 21 Jalan U1/19, Section U1, Hicom-Glenmarie Industrial Park, 40150 Shah Alam, Selangor, Malaysia

Анотація

Таблиця 1

Параметри аналізу зв’язування A2A рецептора аденозину.

Аденозин А2А

Джерело	Людські рекомбінантні клітини HEK-293
Ліганд	0,05 мкМ [3] CGS-21680
Транспортний засіб	1% ДМСО
Час інкубації/темп.	90 хвилин при 25 ° C
Буфер інкубації	50 мМ трис-HCl, рН 7,4, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЕДТА, 2 од/мл аденозиндезамінази
Неспецифічний ліганд	50 мкМ NECA (5-N-етилкарбоксамід аденозин)
KD	0,064 мкМ
B max⁡	7 пмоль/мг білка
Специфічне зв’язування	85%
Кількісний метод	Зв'язування радіоліганду
Критерії значимості	≥50% від максимальної стимуляції
Довідково	CGS-21680

Таблиця 2

Параметри функціонального аналізу рецептора А2А рецептора аденозину.

Аденозин А2А аденилілциклаза

Джерело	Людські рекомбінантні клітини HEK-293
Контроль	0,1 мкМ NECA
Транспортний засіб	0,40% ДМСО
Час інкубації/темп.	10 хвилин при 37 ° C
Буфер інкубації	Модифікований збалансований розчин солі Хенка (HBSS) рН 7,4
Кількісний метод	Кількісне визначення HTRF накопичення цАМФ
Важливі критерії для агоніста	≥50% збільшення цАМФ відносно відповіді NECA
Важливі критерії для антагоніста	≥50% інгібування підвищення цАМФ, спричиненого NECA

Таблиця 3

Параметр функціонального аналізу рецептора Аденозинового рецептора А1.

Аденозин А1

Джерело	Сім'япровід сімейства щурів Wistar
Контроль	0,3 мкМ CHA (N6-циклогексиладенозин)
Транспортний засіб	0,10% ДМСО
Час інкубації/темп.	5 хвилин при 32 ° C
Буфер інкубації	КРЕБС рН 7,4
Кількісний метод	Ізометричне (зміни грам)
Важливі критерії для агоніста	≥50% зменшення нейрогенного посмикування відносно 0,3 мкМ відповіді CHA
Важливі критерії для антагоніста	≥50% пригнічення 0,3 мкМ індукованої CHA релаксації

2.3. Тварини

Дев'яносто дорослих чоловічих щурів SD (3-місячного віку, 200–250 г) та неповнолітніх щурів-самців того ж штаму (35–40-денна, 75–100 г) з Національного інституту харчування, Тарнака, Хайдерабад, були використані, як описано в таблиці 4. Дієта включала стандартну дієту на гранулах від Provimi (гризун Нутрілаб). Неповнолітніх щурів утримували групами по десять в клітці і служили соціальним стимулом для дорослих щурів. Тварин утримували в приміщенні з контрольованою температурою (22 ± 2 ° C), з відносною вологістю повітря від 50 до 70% і піддавали 12-годинному світловому циклу (освітлення о 8:00 ранку) із вільним доступом до їжі та води. Усі експериментальні процедури (номер затвердження IAEC/CPCSEA 1412/a/11 у лютому 2012 р.) Виконувались згідно з керівництвом з догляду за тваринами згідно з Принципами належної лабораторної практики ОЕСР, переглянутою в 1997 р. рішення Ради ОЕСР [C (97) 186/Final].

Таблиця 4

Групування тварин відповідно до досліджуваних матеріалів, дози та шляху введення.

Номер групиРівень дозиМаршрутКількість тварин

1	Управління транспортним засобом	п.о.	10
2	BT 00119 (200 мг/кг)	п.о.	10
3	BT 00119 (300 мг/кг)	п.о.	10
4	BT 00119 (600 мг/кг)	п.о.	10
5	PME 00012 (200 мг/кг)	п.о.	10
6	GBE 000120 (120 мг/кг)	п.о.	10
7	Донепезил (3 мг/кг)	i.p.	10
8	BT 00119 (60 мг/кг)	i.p.	10
9	BT 00119 (120 мг/кг)	i.p.	10

2.4. Лікування

Рослинний екстракт O. stamineus (дози 60, 120, 200, 300 та 600 мг/кг маси тіла), комерційний екстракт G. biloba (120 мг/кг, стандартизований до 27,25% флавонглікозидів гінкго, 6% лактонів терпену, та ≤ 5 ppm гінкголічної кислоти, визначеної методами ВЕРХ), водний екстракт P. minus (200 мг/кг) та препарат донепезил (таблетка ARICEPT, Zydus Cadila Ltd., 3 мг/кг) розчиняли у дистильованій воді. Контрольний розчин складався з дистильованої води (транспортний засіб). Екстракт O. stamineus тестували i.p. і усно. Екстракти O. stamineus у дозах 60 і 120 мг/кг маси тіла і донепезил при 3 мг/кг маси тіла вводили i.p. для прямого порівняння з активністю донепезилу за 120 хв до другої зустрічі з С2. Крім того, екстракти O. stamineus у дозах 200, 300 та 600 мг/кг т. Д., Екстракт G. biloba у дозі 120 мг/кг, концентрація, отримана в результаті минулих досліджень G. biloba на тваринах у пов'язаних з пізнанням досліджень [32], і 200 мг/кг водного екстракту P. minus (як пряме порівняння з нижчою дозою досліджуваного екстракту) та носія вводили перорально, за 120 хв до другої зустрічі C2.

2.5. Тест соціального визнання

Всі значення виражаються як середні значення ± SEM (n дорівнює кількості щурів, включених в кожен аналіз). RI (RI = C2/C1) розраховували для аналізу соціального визнання. Дані аналізували шляхом порівняння контролю проти лікування та стандарту та зміни активності до та після лікування (C1 проти C2) та RI проти контролю, стандарту та лікування за допомогою t-критерію Стьюдента за допомогою програмного забезпечення Graph Pad Prism 4.0.

3. Результат

3.1. Характеристика етанольного екстракту O. stamineus

Хроматографічний профіль композиції етанольного екстракту O. stamineus та еталонних сполук, як показано на малюнках Рисунки 1 1 та та 2, 2, відповідно. Піки, що відповідають відібраним семи сполукам, були ідентифіковані на основі часу утримання відповідно до еталонних стандартів та УФ-спектру. Піки омбуїну (3,3 ′, 5-тригідрокси-4 ′, 7-диметоксифлавону) (0,14%), 3′-гідрокси-4 ′, 5,6,7-тетраметоксифлавону (0,10%), синсетину (0,07%) ), ортосифол B (0,26%), ортосифол A (0,67%), стамінол A (0,45%) та ортосифонон A (0,12%) елююються при час утримування 7,675 хв, 11,220 хв, 15,554 хв, 32,391 хв, 35,911 хв 37,196 хв та 39,604 хв відповідно. Отриманий стандартизований екстракт базується на групі маркерних сполук.

ВЕРХ-хроматограми етанольного екстракту листя O. stamineus.