T4 РНК-лігаза 2, усічена KQ

Не знаєте, яку лігазу вибрати? Зверніться до нашої діаграми властивостей лігази ДНК та РНК.

T4 РНК Лігаза 2, усічена KQ лігує попередньо аденільований 5´ кінець ДНК або РНК до 3´ кінця РНК.

  • Знижена активність лізил-аденилирования
  • Ізольовано з рекомбінантного джерела
  • Поставляється з буфером реакцій 10X
  • Потрібна 5 'попередньо аденільована РНК або ДНК для лігування
  • Випробувано на відсутність ендонуклеаз, екзонуклеаз, РНКаз та фосфатаз
  • Не знаєте, яку лігазу вибрати? Зверніться до нашої діаграми властивостей лігази ДНК та РНК

Вибране відео

усічена

Уникнення забруднення РНКазою

T4 РНК-лігаза 2, усічена KQ (T4 Rnl2tr R55K, K227Q) специфічно лігує попереднільований 5´ кінець ДНК або РНК до 3´ OH кінця РНК. Фермент не використовує АТФ для лігування, але вимагає попередньо аденільованих лінкерів.

T4 Rnl2tr R55K, K227Q - подвійний точковий мутант T4 РНК-лігази 2, усічений (NEB # M0242). Мутація K227 в Т4-РНК-лігазі 2 зменшує фермент лізил-аденілювання (1). K227Q зменшує утворення небажаних продуктів лігування (конкатемери та кола) за допомогою T4 Rnl2tr (2,3), зменшуючи активність слідів T4 Rnl2tr при перенесенні аденилільних груп від лінкерів до 5´-фосфатів вхідних РНК (3). Мутація R55K в T4 Rnl2tr K227Q збільшує лігатурну активність ферменту до рівнів, подібних до T4 Rnl2tr (3).

Виключення АТФ, використання попередньо аденільованих лінкерів та знижена активність ферменту лізил-аденилирования забезпечують найнижчий можливий фон у реакціях лігування. Цей фермент був використаний для оптимізованого лігування лінкера для високопродуктивної побудови бібліотеки послідовностей малих РНК (4).

Джерело продукту

Реагенти в комплекті

Наступні реактиви постачаються з цим продуктом:

NEB #Component NameComponent # Зберігається при (° C) AmountConcentration
    M0373S-20
T4 РНК-лігаза 2, усічена KQ M0373SVIAL -20 1 х 0,01 мл 200000 од./Мл
Буфер реакції лігази T4 РНК B0216SVIAL -20 1 х 1,5 мл 10 X
ПЕГ 8000 B1004SVIAL -20 1 х 1 мл 1 X
T4 РНК-лігаза 2, усічена KQ M0373LVIAL -20 1 х 0,05 мл 200000 од./Мл
Буфер реакції лігази T4 РНК B0216SVIAL -20 1 х 1,5 мл 10 X
ПЕГ 8000 B1004SVIAL -20 1 х 1 мл 1 X

Особливості застосування

  • Лігуйте попередньо аденилированную мітку ДНК або послідовність РНК до будь-якого 3-кінця РНК
  • Приєднайте одноцепочечний аденільований праймер до невеликих РНК для створення бібліотеки кДНК
  • Приєднайте одноцепочечний аденільований праймер до РНК для побудови ланцюгово-специфічної бібліотеки кДНК.

Визначення одиниці

200 одиниць визначається як кількість ферменту, необхідного для дачі 80% лігування 31-мерної РНК з попередньо аденилированним кінцем 17-мерної ДНК [Універсальний лінкер клонування мікроРНК (NEB # S1315)] в загальному реакційному об'ємі 20 мкл за 1 годину при 25 ° C.

5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUr CrArGrCrArArUrA-3´
5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT – NH2-3´

Умови реакції

1X буфер реакційної лігази T4 РНК
Інкубувати при 25 ° C

1X буфер реакції лігази Т4 РНК
50 мМ трис-HCl
10 мМ MgCl2
1 мМ DTT
(рН 7,5 @ 25 ° C)

Умови зберігання

10 мл Трис-HCl
100 мМ NaCl
0,1 мМ ЕДТА
1 мМ DTT
50% гліцерин
рН 7,5 @ 25 ° C