Червоне вино та зелений чай зменшують гастрит, викликаний H pylori або VacA, на моделі миші

Листування: Paolo Ruggiero, Novartis Vaccines & Diagnostics s.r.l., Дослідницький центр, Via Fiorentina 1, Siena I-53100, Італія. [email protected]

Телефон: + 39-577-243111 Факс: + 39-577-243564

Анотація

ЦІЛЬ: Дослідити, чи можуть червоне вино та зелений чай проявляти анти-H pylori або анти-VacA активність in vivo на мишачій моделі експериментальної інфекції.

МЕТОДИ. Концентрати червоного вина та зеленого чаю без етанолу вводили перорально у вигляді суміші двох напоїв мишам, інфікованим H pylori, або окремо мишам, обробленим VacA. Колонізація шлунка та запалення шлунка були кількісно визначені за допомогою мікробіологічних, гістопатологічних та імуногістохімічних аналізів.

РЕЗУЛЬТАТИ. У інфікованих H pylori мишей суміш червоного вина та зеленого чаю значно запобігала гастриту та обмежувала локалізацію бактерій та VacA на поверхні шлункового епітелію. Подібним чином обидва напої суттєво запобігали пошкодженню шлункового епітелію у мишей, оброблених VacA; зелений чай, але не червоне вино, також змінив локалізацію VacA в шлунковому епітелії.

ВИСНОВОК: Червоне вино та зелений чай здатні запобігти індукованому H pylori пошкодженню шлункового епітелію, можливо, із затримкою VacA. Це спостереження підтверджує можливу відповідність дієти до патологічного результату інфекції H pylori.

ВСТУП

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Бактерії

Використовували SPM 326, тип I H pylori, що експресує s1/m1 ізоформу VacA [15]. Бактерії вирощували при температурі 37 ° C на пластинах колумбійського агару (Oxoid, Basingstoke, UK), що містять 5% свіжої дефібринованої кінської сироватки та добавки Дента (Oxoid), в мікроаерофільних умовах, використовуючи CampyGen (Oxoid), і збирали їх у фізіологічному розчині безпосередньо перед випробуванням.

Токсин

Власний s1/m1-тип VacA був виготовлений та протестований на вакуоліруючу активність на клітинах HeLa, як описано раніше [16,17]. Перед використанням його активували при рН 2,0 протягом 10 хв при R.T., потім нейтралізували і розбавляли у фізіологічному розчині.

Червоне вино та концентрати зеленого чаю

Червоне вино (РАВ) вироблялося на місцевому винограднику (Сармеде, Італія) традиційним процесом спонтанного бродіння без добавок. Інфузію зеленого чаю (GT) отримували кип’ятінням 2 г ліофілізованих та необроблених листя з Марокко в 1 л дистильованої води протягом 5 хв. Концентрати РАВ та безалкогольних РАВ отримували вакуумною перегонкою при 30 ° C, а потім зберігали в аликвотах при -20 ° C. Перед введенням концентрати розморожували, розводили у воді до 3-кратної (RW) або 1,5-кратної (GT) концентрації порівняно з початковим об'ємом і фільтрували при 0,2 мкм. Суміш RW + GT готували при тих же кінцевих концентраціях.

Миші та навчальний дизайн

Таблиця 1

Графік лікування

Група	n	D -1 до D жертви	D 0	D 2	D 4	D 14
RW + GT	6	RW + GT	Інфекція	Інфекція	-	Жертва
Заражений	6	1% глюкози	Інфекція	Інфекція	-	Жертва
Не заражений	6	1% глюкози	Фізрозчин	Фізрозчин	-	Жертва
RW	5	RW	VacA 10 мкг	VacA 10 мкг	Жертва	-
5	RW	VacA 50 мкг	VacA 50 мкг	Жертва	-
GT	5	GT	VacA 10 мкг	VacA 10 мкг	Жертва	-
5	GT	VacA 50 мкг	VacA 50 мкг	Жертва	-
Контроль VacA	5	1% глюкози	VacA 10 мкг	VacA 10 мкг	Жертва	-
5	1% глюкози	VacA 50 мкг	VacA 50 мкг	Жертва	-
Фізрозчин	5	1% глюкози	Фізрозчин	Фізрозчин	Жертва	-

Гістопатологія

Із шлунків, вкладених у парафін, вирізали ділянки товщиною 4 мкм, депарафінізували та фарбували гематоксилін-еозином (ВІН), а потім сліпо досліджували. Гастрит оцінювали в антральному відділі, тілі та очному дні кожного шлунка відповідно до оновленої Сіднейської системи [18] та оцінювали від 0 до 3, що відповідає нормальному, легкому, середньому та важкому, відповідно. Шлункові зрізи також піддавали імуногістохімічному (IHC) фарбуванню, використовуючи або анти-H pylori поліклональне антитіло (HistoLine), або анти-VacA моноклональне антитіло, як вже було описано [13,19].

Статистичний аналіз

Дані оцінювали за допомогою однобічного U-тесту Манна-Уїтні. Значення ймовірності менше 5% (Р 3 та 2,6 × 10 3 КУО/шлунок відповідно, не маючи значної різниці (Р = 0,22). У той час як у тварин, які отримували RW + GT, H pylori виявлявся ІГХ переважно на поверхні слизової шлунка (Рисунок (Figure1A), 1A), у зараженому контролі спостерігали як поверхневе, так і глибоке фарбування (малюнок (Figure1C). 1C). У сусідніх ділянках локалізація VacA за допомогою IHC виявилася дуже подібною до локалізації H pylori, з різниця в тому, що фарбування VacA виявилося дещо слабшим у тварин, які отримували RW + GT (Рисунок (Рисунок 1B) 1B) і дещо сильнішим у заражених контрольних груп (Рисунок (Рисунок 1D) 1D) порівняно з відповідним фарбуванням H pylori.

Репрезентативні зображення IHC виявлення H pylori (A і C) або VacA (B і D) на зрізах слизової шлунка у мишей, інфікованих H pylori, у присутності (A і B) або у відсутності (C і D) RW + Лікування ГТ. У шлунковому епітелії інфікованих контрольних груп (C і D, сусідні ділянки) H pylori і VacA виявляються з подібною картиною як поверхнево, так і глибоко, тоді як при обробці RW + GT (A і B, сусідні ділянки) імунозабарвлення в основному обмежується до поверхні епітелію. Вставки з більшим збільшенням демонструють типову морфологію H pylori (наконечники стріл).

Червоне вино та зелений чай запобігають гастриту, викликаному H pylori

Оцінка гастриту мишей, інфікованих H pylori (A) або VacA (B), у присутності або у відсутності RW та/або GT, як зазначено. Середнє значення оцінок антруму, тіла та очного дна кожної групи. Бари = SE. a P b P (Рисунок 2B). 2B). Зміни слизової значно менші у мишей, які отримували RW або GT (рисунки (малюнки 2B, 2B, 3A та C), ніж ті, що спостерігались у контролях VacA (малюнки (малюнки2B 2B та and3E). 3E). Контролі VacA мали легке пошкодження епітелію. в антральному відділі та середньотяжкий/важкий у корпусі та очному дні, де спостерігалося зміна архітектури слизової, з вакуолізацією епітелію, дифузною ерозією слизової та деякими виразками (рисунок (рис. 3E). 3E). помітні зміни, як очікувалося (Рисунки (Рисунки 2B 2B та and 3G 3G).

Репрезентативні зображення зрізів слизової оболонки шлункового тіла мишей, які отримували 50 мкг VacA у присутності (AD) або у відсутність (E і F) RW або GT, як зазначено, у порівнянні з контролем, обробленим фізіологічним розчином (G і H) . Фарбування ВІН (A, C, E та G): контроль VacA (E) демонструє типову втрату архітектури слизової, із ділянками клітинного сміття та домішками запальних клітин (наконечник стрілки), майже не виявляється у присутності RW (A) або GT (С). Виявлення IHC VacA (B, D, F і H): розподіл VacA при обробці РАВ (B) є як поверхневим, так і глибоким, аналогічно розподілу контролю, обробленого VacA (F), тоді як при обробці GT (D) VacA виявляється лише на поверхні епітелію шлунка.

Зелений чай змінює локалізацію VacA в слизовій оболонці шлунка

Наявність та розподіл VacA досліджували IHC у слизовій оболонці шлунка, обробленої RW та GT (Рисунок (Рисунок 3B 3B та D), у порівнянні з контролем VacA та фізіологічного розчину (Рисунок (Figure3F 3F та H). поверхнево і глибоко в слизовій оболонці шлунка мишей, які отримували або 10 мкг (дані не наведені), або 50 мкг VacA (рис. (Рис. 3F), 3F), вища доза VacA дає якісно подібне, але більш інтенсивне фарбування, ніж нижча доза . Миші, оброблені RW, продемонстрували подібне фарбування порівняно з контролем, обробленим VacA (рисунок (малюнок 3B 3B і F, відповідно). На відміну від цього, слизова шлунка мишей, оброблених GT, показала лише поверхневе фарбування VacA, яке не виявлялося в залозі крипти (рисунок (малюнок 3D). 3D). Контроль сольового розчину був повністю негативним, як очікувалося (малюнок (рисунок 3Н 3Н).

ОБГОВОРЕННЯ

ПОДЯКИ

Ми в боргу перед G Matteucci та R Sabato за управління тваринними ресурсами, а також за S Torricelli та M Tortoli за поводження з тваринами.

КОМЕНТАРИ

Передумови

Інфікування H pylori шлунка людини викликає атрофічний гастрит, виразкову хворобу шлунка та лімфоїдну тканину (MALT), пов'язану зі слизовою оболонкою шлунка, і відіграє відповідну роль у канцерогенезі шлунка. Сучасна терапія, що базується на антибіотиках, стикається з проблемами стійкості до антибіотиків або відсутністю відповідності пацієнта. На даний момент жодна вакцина не ліцензована. Сучасні дослідження зосереджені як на протимікробних препаратах, так і на вакцинах.

Межі досліджень

Повідомлялося, що деякі рослинні екстракти або речовини рослинного походження, включаючи поліфеноли, виявляють анти-H pylori активність in vitro та/або, що більш важливо, in vivo. Це дослідження може призвести не тільки до відкриття нових антимікробних препаратів, але й до з'ясування можливої відповідності дієти у складному механізмі взаємодії хазяїн-збудник та в патологічному результаті інфекції H pylori.

Інновації та прориви

Ми вперше повідомляємо про здатність суміші червоного вина (RW) та зеленого чаю (GT) обмежувати на поверхні слизової оболонку шлунку H pylori, яка в іншому випадку була як поверхневою, так і глибокою. Змінена колонізація у мишей, оброблених RW + GT, супроводжувалась профілактикою гастриту, подібно до тієї, яку повідомили Matsubara et al з екстрактами GT у монгольських піщанок. У мишей, яким вводили токсин VacA, лікування GT попереджало запалення шлунка і обмежувало проникнення VacA в слизову шлунка, тоді як RW міг запобігати лише запаленню шлунка; ефект обох речовин може бути принаймні частково пов'язаний з інгібуванням VacA, яке ми раніше спостерігали in vitro з цими речовинами. Результати, отримані з GT у мишей, оброблених VacA, подібні до результатів, про які повідомляють Yahiro та ін.

Експертна оцінка

Автори описали вплив червоного вина та зеленого чаю на гастрит шляхом зараження H pylori або VacA у мишей. Цікаво, що поєднання червоного вина та зеленого чаю запобігало індукції пошкодження слизової оболонки шлунка у моделі тварини. Однак незрозуміло, чи могли червоне вино та зелений чай запобігти шкоді, відповідно.

Оскільки автори лікували тварин перед введенням мікроорганізму (або VacA), не було зрозуміло, чи може комбіноване лікування інгібувати встановлений гастрит. Подальша робота може краще пояснити цей момент.

Виноски

Частково за підтримки гранту CNT Target Project Біотехнологія та гранту Університету Падуї для молодих дослідників

S- Редактор Wang GP L- Редактор Luzte M E- Редактор Bi L