Дієтичний пептид шовку запобігає ожирінню, спричиненому дієтою, і сприяє жировому підрум’яненню, активуючи у мишей активовану AMP білкову кіназу.

Схема отримання пептиду шовку.

Мас-спектрометричний аналіз пептиду шовку. Типова хроматограма SP, отримана за допомогою системи TOF MS ES + з високою роздільною здатністю.

Високоефективний рідинно-хроматографічний аналіз пептиду шовку. ВЕРХ-хроматограма для SP. Абревіатури: Ала, Аланін; Cys, цистеїн; Asp, аспарагінова кислота; Глю, глутамінова кислота; Phe, фенілаланін; Глі, Гліцин; Його, Гістидин; Іль, Ізолейцин; Лис, Лізин; Лей, лейцин; Мет, метіонін; Pro, Proline; Арг, Аргінін; Ser, Serine; Thr, треонін; Валь, Валін; Тир, тирозин; IS, Інтерполяція стандарту (L-2-аміномасляна кислота).

Пептид шовку запобігає розвитку ожиріння, спричиненого дієтою, у мишей із ожирінням, спричинених HFD. (A) Щотижневі вимірювання маси тіла, (B) збільшення маси тіла та (C) фотографії представницьких мишей, які отримували лікування протягом 6 тижнів. (D) Вплив SP на масу органів у групах CD та HFD. * p p E) Споживання їжі та (F) споживання води на одиницю маси тіла. Концентрацію креатиніну та (H) лептину в сироватці крові вимірювали за допомогою колориметричних наборів. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p ab> b> c).

Захисна дія пептиду шовку проти накопичення ліпідів у білій жировій тканині від індукованих HFD мишей із ожирінням. (A) Фарбування гематоксиліном та еозином sWAT та vWAT у мишей, які отримували лікування протягом 6 тижнів, і кількісне визначення відносного відсотка діаметра адипоцитів у sWAT та vWAT (дані збирали з пофарбованих H & E ділянок мишей у кожній групі, 15–30 клітин на одну ділянку, за допомогою програмного забезпечення Image J). Експресію адипогенних факторів у (B) sWAT та (C) vWAT оцінювали за допомогою вестерн-блот. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p ab> b> bc> c).

Вплив пептиду шовку на побуріння білої жирової тканини у мишей із ожирінням, індукованих HFD. Експресію маркерів коричневого кольору (PRDM16, PGC1α, UCP1 та UCP3) у (A) sWAT та (B) vWAT визначали методом вестерн-блот. Експресію генів, пов'язаних з термогенезом, у (C) sWAT та (D) vWAT вимірювали за допомогою qRT-PCR. * p p E) sWAT та (F) vWAT були зафіксовані при збільшенні 800 ×. (G) Ректальна температура тіла після 6 тижнів лікування (n = 10), виміряна в денний час при температурі навколишнього середовища 22 ° C. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p ab> b> bc> c).

Пептид шовку покращує стеатоз печінки та індукує окислення жирних кислот у мишей, що харчуються HFD. (А) Репрезентативні зображення фарбування олійно-червоним кольором зрізів печінки мишей, які отримували лікування протягом 6 тижнів. (B) Сироватку ALT та (C) AST вимірювали за допомогою колориметричних наборів. Рівні експресії білків, що беруть участь у (D) ліпогенезі та (E) окисленні жирних кислот. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p b> c).

Пептид шовку пригнічує накопичення жиру та посилює побуріння у первинних культурах підшкірних білих адипоцитів. (А) Життєздатність первинних адипоцитів, оброблених SP протягом 24 годин, оцінювали за допомогою аналізу МТТ. (B) Вплив SP на накопичення ліпідів оцінювали за допомогою фарбування O червоним маслом. (C, D) Рівні експресії білка C/EBPα, FABP4, CPT1 та UCP1 вимірювали в підшкірних білих адипоцитах. (E) Імунофлуоресцентні зображення адипоцитів були зроблені при збільшенні 800 ×. Після диференціації клітини фіксували метанолом, а потім фарбували MitoTracker ® ​​363 Deep Red або антитілом проти UCP1. (F) Браунінг підвищувався в адипоцитах, культивованих 50 нМ Т3 та 1 мМ розиглітазону та оброблених SP, і вимірювали експресію білка генів, характерних для BAT. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 4). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p b> c> d> e).

Вплив AMPK на морфологію крапель ліпідів та експресію UCP1 у первинних культурах підшкірних білих адипоцитів. (A, C) Морфологію оцінювали за допомогою оптичної мікроскопії зі збільшенням 400 ×. Шкала шкали: 100 мМ. (B, D) Первинні клітини обробляли 10 мкМ AICAR або 5 мкМ дорсоморфіну, і вплив на експресію білка визначали за допомогою вестерн-блот. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 4). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p b> c> d).

Анотація

дієтичний

Схема отримання пептиду шовку.

Мас-спектрометричний аналіз пептиду шовку. Типова хроматограма SP, отримана за допомогою системи TOF MS ES + з високою роздільною здатністю.

Високоефективний рідинно-хроматографічний аналіз пептиду шовку. ВЕРХ-хроматограма для SP. Абревіатури: Ала, Аланін; Cys, цистеїн; Asp, аспарагінова кислота; Глю, глутамінова кислота; Phe, фенілаланін; Глі, Гліцин; Його, Гістидин; Іль, Ізолейцин; Лис, Лізин; Лей, лейцин; Мет, метіонін; Pro, Proline; Арг, Аргінін; Ser, Serine; Thr, треонін; Валь, Валін; Тир, тирозин; IS, Інтерполяція стандарту (L-2-аміномасляна кислота).

Пептид шовку запобігає розвитку ожиріння, спричиненого дієтою, у мишей із ожирінням, спричинених HFD. (A) Щотижневі вимірювання маси тіла, (B) збільшення маси тіла та (C) фотографії представницьких мишей, які отримували лікування протягом 6 тижнів. (D) Вплив SP на масу органів у групах CD та HFD. * p p E) Споживання їжі та (F) споживання води на одиницю маси тіла. Концентрації креатиніну та (H) лептину в сироватці крові вимірювали за допомогою колориметричних наборів. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p ab> b> c).

Захисна дія пептиду шовку проти накопичення ліпідів у білій жировій тканині від мишей із ожирінням, індукованих HFD. (A) Фарбування гематоксиліном та еозином sWAT та vWAT від мишей, які отримували лікування протягом 6 тижнів, та кількісне визначення відносного відсотка діаметра адипоцитів від sWAT та vWAT (дані збирали з пофарбованих H & E ділянок мишей у кожній групі, 15–30 клітин на одну ділянку, за допомогою програмного забезпечення Image J). Експресію адипогенних факторів у (B) sWAT та (C) vWAT оцінювали за допомогою вестерн-блот. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p ab> b> bc> c).

Вплив пептиду шовку на побуріння білої жирової тканини у мишей із ожирінням, індукованих HFD. Експресію маркерів коричневого кольору (PRDM16, PGC1α, UCP1 та UCP3) у (A) sWAT та (B) vWAT визначали методом вестерн-блот. Експресію генів, пов'язаних з термогенезом, у (C) sWAT та (D) vWAT вимірювали за допомогою qRT-PCR. * p p E) sWAT та (F) vWAT були зафіксовані при збільшенні 800 ×. (G) Ректальна температура тіла після 6 тижнів лікування (n = 10), виміряна в денний час при температурі навколишнього середовища 22 ° C. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p ab> b> bc> c).

Пептид шовку покращує стеатоз печінки та індукує окислення жирних кислот у мишей, що харчуються HFD. (А) Репрезентативні зображення фарбування олійно-червоним кольором зрізів печінки мишей, які отримували лікування протягом 6 тижнів. (B) Сироватку ALT та (C) AST вимірювали за допомогою колориметричних наборів. Рівні експресії білків, що беруть участь у (D) ліпогенезі та (E) окисленні жирних кислот. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 8). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p b> c).

Пептид шовку пригнічує накопичення жиру та посилює побуріння у первинних культурах підшкірних білих адипоцитів. (А) Життєздатність первинних адипоцитів, оброблених SP протягом 24 годин, оцінювали за допомогою аналізу МТТ. (B) Вплив SP на накопичення ліпідів оцінювали за допомогою фарбування O Oil red O. (C, D) Рівні експресії білка C/EBPα, FABP4, CPT1 та UCP1 вимірювали в підшкірних білих адипоцитах. (E) Імунофлуоресцентні зображення адипоцитів були зроблені при збільшенні 800 ×. Після диференціації клітини фіксували метанолом, а потім фарбували MitoTracker ® ​​363 Deep Red або антитілом проти UCP1. (F) Браунінг пропагували в адипоцитах, культивованих 50 нМ Т3 і 1 мМ розиглітазону і обробляли SP, і вимірювали експресію білка генів, характерних для BAT. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 4). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p b> c> d> e).

Вплив AMPK на морфологію крапель ліпідів та експресію UCP1 у первинних культурах підшкірних білих адипоцитів. (A, C) Морфологію оцінювали за допомогою оптичної мікроскопії зі збільшенням 400 ×. Шкала шкали: 100 мМ. (B, D) Первинні клітини обробляли 10 мкМ AICAR або 5 мкМ дорсоморфіну, і вплив на експресію білка визначали за допомогою вестерн-блот. Дані виражаються як середнє значення ± SD (n = 4). Значення з різними буквами суттєво відрізнялися; p b> c> d).